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背景：20世纪80年代以来，国内外陆续报道了“左旋咪唑(LMS)与脑炎综合征”，本研究室的多项目流行病学研究论证了“LMS与原因不明炎性脱髓鞘脑病”的因果关系，和实验研究也证实了LMS能促发/加重炎症性白质脱髓鞘性脑病，放射性配体受体结合试验发现LMS能竞争拮抗咪唑啉2受体的配体咪唑克生(idazoxan，IDA)，与咪唑啉2受体结合而发挥生物学效应，还初步证实了小剂量的咪唑啉2受体的配体咪唑克生(IDA，2mg/kg)对中枢炎症性白质脱髓鞘脑病的动物模型，即实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)有保护作用，能减轻EAE病情。
目的：(1)观察不同剂量IDA对EAE的干预作用，探讨其剂量效应关系；(2)观察IDA对小胶质/星形胶质细胞和促炎/抑炎细胞因子的影响，探讨咪唑克生干预作用的可能机制。
方法：50只大鼠随机分为5组，分别为空白对照组，EAE模型组，IDA0.5mg/kg组，IDA1.5mg/kg组和IDA4.5mg/kg组，每组10只。除空白对照组(每只以同样方式注射相同剂量的生理盐水)外，其余各组大鼠给予四肢足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆(guineapigspinalcordhomogenate，GPSCH)和完全弗氏佐剂(completeFreund’sadjuvant，CFA)制成的抗原乳剂诱导EAE，GPSCH-CFA免疫当日定为第0天，并于免疫后0h及48h分别在两侧腹股沟皮下注射0.1ml百日咳菌苗以加强免疫反应。IDA0.5mg/kg组、IDA1.5mg/kg组、IDA4.5mg/kg组分别于免疫当天开始给予IDA0.5mg/kg、1.5mg/kg、4.5mg/kg，ip.，bid×10d。每日两次观察并记录动物行为学及体重的变化，比较IDA对EAE发病率、潜伏期、症状评分的影响。于发病高峰期处死动物，取脑和脊髓行HE染色和Kluver&Barrera髓鞘染色，观察比较病理组织学的变化；用免疫组织化学法测中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)星形胶质细胞和小胶质细胞的变化(分别以GFAP抗体和OX-42/CD11b抗体标记)，并进行定量分析，比较IDA对它们的影响；同时用逆转录-聚合酶链反应(reversetranscriptasepolymerasechainreaction，RT-PCR)法测大鼠脊髓干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)、白介素-12p40(interleukin-12subunitp40，IL-12p40)、白介素-10(interleukin-10，IL-10)和转化生长因子β1(transforminggrowthfactorβ1，TGF-β1)以及胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein，GFAP)mRNA的表达。
结果：(1)行为学观察大鼠于免疫后第11天开始陆续发病，除IDA1.5mg/kg组潜伏期(13.50±0.50天)较EAE组(11.37±0.26天)明显延长(P＜0.05)外，其余各组潜伏期无明显差异。EAE组发病率为8/10，IDA0.5mg/kg组发病率亦为8/10，与EAE组相同，而IDA1.5mg/kg组和IDA4.5mg/kg组发病率分别为2/10和3/10，均比EAE组明显下降(p＜0.05)。从病情严重度来看，IDA0.5mg/kg组的最大临床症状评分(3.25±0.31)与EAE组(4.00±0.27)无明显差异，而IDA1.5mg/kg组和IDA4.5mg/kg(分别为2.00±0.00和2.00±0.58)较EAE组明显减轻(P＜0.01)。(2)病理组织学变化：HE染色见发病大鼠的脑、脊髓实质内有大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，分布以脑干和腰髓居多，大多在灰白质交界区，有些炎症细胞围绕在小血管周围，形成典型的“血管袖套样”改变；并可见神经细胞变性、坏死，胶质细胞结节等病理变化。Kluver＆Barrera髓鞘染色见发病大鼠CNS内有大小不等的片状髓鞘脱失。具有以上病理改变的大鼠视为有EAE病理损害，EAE组病理损害率为8/10，IDA0.5mg/kg组病理损害率为8/10，IDA1.5mg/kg组5/10，IDA4.5mg/kg组6/10，虽然各组病理损害率无统计学差异。但IDA各组脑和脊髓的病理改变明显减轻，尤以IDA1.5mg/kg和4.5mg/kg组减轻明显，病理组织学评分也较EAE组明显下降(p＜0.05)。(3)星形胶质细胞GFAP的免疫组化和RT-PCR结果：空白对照组CNS仅有少量细小突起着色的星形胶质细胞；而EAE组CNS的GFAP阳性细胞数目比空白对照组明显增加(P＜0.01)，染色加深，突起变粗变长。与EAE组比，IDA0.5mg/kg组GFAP阳性细胞染色数目和染色强度均无明显变化，IDA1.5mg/kg组和IDA4.5mg/kg组阳性细胞染色数目有升高趋势染色加深(尤其是IDA4.5mg/kg组)，但没有统计学意义。RT-PCR结果显示GFAPmRNA在IDA1.5mg/kg组和IDA4.5mg/kg组有升高趋势，但没有统计学意义。(4)小胶质细胞免疫组化结果：空白对照组大鼠脑内只有少量淡染的CD11b阳性细胞，为静止的分枝状，突起细长。EAE发病大鼠的中枢神经系统内，尤其是大脑和脑干内，小胶质细胞活化增生，表现为CD11b染色明显加深，突起回缩变浓，胞体变大，CD11b浓染细胞数量增加(p＜0.05)。IDA0.5mg/kg组小胶质细胞较EAE组无明显变化，而IDA1.5mg/kg组和4.5mg/kg组CD11b阳性细胞明显减少(p＜0.05)。(5)细胞因子RT-PCR结果：脊髓IL-10和TGF-βmRNA的表达，IDA1.5mg/kg及IDA4.5mg/kg组较EAE组明显升高(P＜0.05)，IDA0.5mg/kg组与EAE组比无显著差别；而脊髓中IL-12p40mRNA表达水平，IDA三组均较EAE组降低(P＜0.01)，尤以IDA4.5mg/kg组明显；IFN-γmRNA的表达，IDA1.5mg/kg及IDA4.5mg/kg组较EAE组明显升高(P＜0.01)，而IDA0.5mg/kg组与EAE组比无显著差别。
结论：(1)Wistar大鼠免疫后给予咪唑克生1.5mg/kg和4.5mg/kg能降低EAE的发病率、减轻临床症状、减轻CNS炎症细胞浸润和髓鞘脱失，提示咪唑克生对EAE有明显的抑制作用。(2)咪唑克生能抑制小胶质细胞的增生活化，能促进星形胶质细胞的增殖与激活。对EAE的抑制作用与中枢炎症细胞免疫平衡的调整机制有关。(3)咪唑克生能下调中枢神经系统促炎细胞因子IFN-γ和IL-12p40mRNA的表达，上调调节性细胞因子TGF-β1和IL-10mRNA的表达。对EAE的抑制作用可能与中枢炎症细胞因子免疫平衡的调整机制有关。(4)咪唑克生参与了EAE的中枢炎症反应调节过程，对EAE起保护作用。