PLK1表达下调诱导Raji细胞凋亡及其分子机制的研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:ouyang
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[目的]Polo样激酶1(polo-like kinase 1,PLK1)是一种参与有丝分裂过程的酶,调节细胞周期的多个环节。本研究通过体外细胞实验及裸鼠移植瘤实验,观察PLK1表达下调对Raji细胞凋亡等生物学行为的影响,并探讨其分子机制,为PLK1在淋巴瘤中作用的分子机制研究及靶向治疗提供更多的实验依据。[方法]利用TUNEL染色、Hoechst 33258染色、流式细胞术及裸鼠移植瘤实验,观察PLK1表达下调对细胞凋亡及裸鼠成瘤等生物学行为的影响。利用q RT-PCR和Western blot方法观察PLK1表达下调对Bax等凋亡相关分子及Cyclin D1等周期调控分子的影响。[结果]TUNEL染色实验结果显示:实验组(Raji-PLK1-sh RNA)的细胞凋亡率要高于对照组(Raji-NC-sh RNA及Raji)(P<0.0001),差异有统计学意义。Hoechst 33258染色结果显示:与Raji-NC-sh RNA及Raji相比,Raji-PLK1-sh RNA细胞凋亡率明显升高。流式细胞术结果显示:Raji-PLK1-sh RNA组比Raji-NC-sh RNA及Raji的细胞早期凋亡率要高(P<0.001),差异有统计学意义。这些结果均表明PLK1表达下调使Raji细胞的凋亡率升高了。裸鼠移植瘤实验结果显示:与Raji-NC-sh RNA及Raji相比,Raji-PLK1-sh RNA裸鼠瘤体体积明显减小(P<0.05),这表明PLK1表达下调,对裸鼠肿瘤的增长有明显抑制作用。qRT-PCR实验结果显示:与Raji-NC-sh RNA及Raji组相比,Raji-PLK1-sh RNA组wtp53、Bax、Rb和Caspase3基因的m RNA表达上调,PLK1、mutp53、CDC2、Survivin、Cyclin D1和Bcl-2基因m RNA表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示:与Raji-NC-sh RNA及Raji相比,RajiPLK1-sh RNA组wtp53、Bax、Rb和Caspase3蛋白表达上调,PLK1、mutp53、CDC2、Survivin、Cyclin D1和Bcl-2蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]1、PLK1表达下调促进Raji细胞凋亡,通过对wtp53的活化,下调Survivin;上调Bax和下调Bcl-2的活性,从而激活Caspase3。2、PLK1表达诱导Raji细胞周期,通过抑制CDC2和Cyclin D1基因;活化p53和Rb基因发挥作用。
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