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目的:直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,约占大肠癌的60%,其发病率呈现逐年增加的趋势。手术治疗是直肠癌的主要治疗手段,但行根治性手术后仍有一定的复发率,如何降低局部复发率,提高患者的生活质量,一直是外科医生所关注的问题。全直肠系膜切除术(total mesorectal excision,TME)手术原则的广泛推广,使直肠癌术后局部复发率显著降低。但对这部分患者行根治性切除手术后仍有一定的复发率,究其原因,部分是由于手术后对疾病的临床病理分期不准确,体内存在的微转移病灶未能被及时发现,分期评估偏低,导致术后综合治疗方案选择不当,如能对这些病例进行准确地分期,找到非常微小隐匿的转移性病变,降低转移的漏诊率,并以此为依据制定合理的术后综合治疗方案,将会明显提高这部分患者的生存期和生活质量。肿瘤微转移一般是指非血液系统恶性肿瘤在发展过程中,播散并存活于淋巴系统、血液循环、骨髓、肝、肺等组织器官中的微小瘤细胞灶,它可以是单个瘤细胞或独立的瘤细胞灶,无特殊血液供应,直径<2mm,常无任何临床表现,常规检查方法如CTMRI及普通病理学检查都很难发现。结直肠癌术后复发和转移是导致患者死亡的主要原因,在接受根治性手术的患者中,仍有50%患者死于术后肿瘤局部复发和转移,即使Dukes A期和B期的结直肠癌患者中术后仍有一定的复发和转移率,其原因可能与早期结直肠癌患者即已存在肿瘤微转移有关。近年来,直肠系膜环周切缘(circumferential resection margin, CRM)日益受到人们的关注,而且越来越多的证据证实CRM阳性是导致直肠癌术后局部复发的重要因素。病理大组织切片能够客观且准确地观察直肠癌术后CRM的情况。这种病理学检查方法可以从整体上观察直肠癌转移灶在直肠系膜内的方位及其与肿瘤原发灶和直肠壁的关系,通过这种方法可以准确地观察手术切缘情况,判断CRM是否阳性。同时结合免疫组化技术,可以发现环周切缘存在的肿瘤微转移病灶,从而进一步提高CRM阳性的检出率。本研究通过HE染色与免疫组化病理大组织切片相结合,探讨如何能进一步提高CRM阳性的检出率,并与43例临床病例资料相结合,发现CRM的存在规律,指导临床治疗。方法:1.HE染色病理大组织切片:通过大组织切片观察CRM情况与临床病理资料的关系,然后进行统计学分析。2.免疫组织化学法:采用S-P法,按照试剂盒说明书进行操作,采用1:80、1:80、1:40稀释的鼠抗人CK20、CEA、Ki-67单克隆抗体分别检测直肠癌系膜内微转移灶,发现CRM的微转移。PBS代替一抗作为阴性对照。结合临床病理资料对其结果进行相关统计学分析。结果:1.HE染色病理组织大切片检测CRM阳性率为25.58%(11/43)。其中在肿瘤分化程度方面,高、中分化组CRM阳性率分别为0(0/2)、20.59%(7/34),而在低分化组CRM阳性率高达57.14%(4/7),统计学分析显示,高、中分化组与低分化组之间存在显著性差异,有统计学意义(p=0.036<0.05),可以认为CRM的阳性率低分化组高于高、中分化组。在肿瘤位置(肿瘤下缘距齿线距离)方面,≤5cm组CRM的阳性率为50.00%(7/14)高于>5cm组CRM的阳性率13.79%(4/29),统计学分析显示两组间有显著性差异(p=0.035<0.05)。而在患者的性别、肿瘤大体类型、手术方法(开腹/腹腔镜)方面均与CRM阳性率无明显相关性(P>0.05)。2.免疫组化结果显示,CK20、CEA、Ki-67切片检测CRM的阳性率分别为32.56%(14/43)、30.23% (13/43)、27.91%(12/43)。其中在肿瘤分化程度方面,三项指标均证实高、中分化组CRM阳性率低于低分化组,统计学分析存在显著性差异(P<0.05)。在肿瘤位置(肿瘤下缘距齿线距离)方面,三项指标均显示<5cm组CMI阳性率高于≥5cm组,统计学显示存在显著性差异(P<0.05)。三项指标显示患者性别、肿瘤大体类型、淋巴结转移情况、手术方法(开腹/腹腔镜)均与CRM阳性率无明显相关性(P>0.05)。3.采用HE染色联合免疫组化三项指标共检测出20例CRM阳性的患者,阳性率为46.51%(20/43)。HE染色、CK20、CEA、Ki-67切片检测CRM的阳性率分别为25.58%(11/43)、32.56%(14/43)、30.23% (13/43)、27.91%(12/43),两两比较均无统计学意义(p=0.56>0.05)。统计学显示HE染色、CK20、CEA、Ki-67切片联合检测CRM的阳性率高于其中任何一种检测方法(p=0.043<0.05)。结论:1 CRM阳性是患者术后局部复发的重要危险因素,已被临床医生所关注。2病理大组织切片可以很好的观察CRM的情况,术后应常规检查。3 HE染色与免疫组化CK20、CEA、Ki-67三种指标联合检测CRM的阳性率较高。4对于存在CRM阳性的患者,无论病理分期早晚,都应术后进行放疗或者化疗。5肿瘤的分化程度,肿瘤的位置是影响CRM阳性率的重要因素。6 CRM阳性率与患者的性别,肿瘤大体类型,手术方法(开腹/腹腔镜)无明显相关性。