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轮状病毒(RV),属呼肠孤病毒科轮状病毒属,可以引起多种幼龄动物腹泻。A群猪轮状病毒(PoRV)通常是多种血清型混合感染仔猪,主要引起仔猪厌食、严重腹泻、脱水,严重时导致死亡。同时,也是在培育、繁殖、保存SPF猪工作中的重点监测、控制的病毒性传染病病原。目前,PoRV已在全世界范围内传播,给全球养猪业带来了严重的经济损失。RV含有11节段dsRNA,编码12种蛋白。VP7是RV的表面结构蛋白,与VP4共同组成病毒粒子的最外层结构,VP7既可以介导病毒入侵脱衣壳,又含有刺激宿主个体产生中和抗体的抗原表位。因此,本研究对PoRV的VP7进行了抗原表位的鉴定,从而为PoRV的检测及抗病毒免疫的研究奠定基础。本研究利用RT-PCR方法克隆了G5和G11血清型VP7基因,并连接至pMD-18T测序载体进行测序。以测序正确质粒为模板,PCR扩增获得截短的G5-VP7、G11-VP7基因(tVP7,151-936)连接至pGEX-6p-1表达载体,构建质粒为G5-6p-tVP7、G11-6p-tVP7转化至DH5α。测序正确的菌体经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析结果显示：重组蛋白G5-tVP7-GST、G11-tVP7-GST大小为56Ku。两重组蛋白经western blot试验证明均可以和抗PoRV的阳性血清发生反应。以切胶纯化的G5-tVP7-GST、G11-tVP7-GST重组蛋白,常规免疫BALB/c小鼠。通过常规杂交瘤制备技术获得了3株稳定分泌抗G5-VP7蛋白的杂交瘤细胞和4株稳定分泌抗G11-VP7蛋白的杂交瘤细胞。抗G5-VP7蛋白MAbs A6、G8亚类为IgG2b, H4亚类为IgG1,抗G11-VP7蛋白MAbs4B4、4E6亚类为IgG2b,4C5亚类为IgG1,5G2亚类为IgG2a。间接免疫荧光试验表明MAbs可与在MA104细胞上接种的RV产生免疫荧光。Western blot检测表明,MAbs与RV VP7蛋白反应,不与GST标签反应。其中4B4具有中和活性。分段表达G11-VP7蛋白,利用Western blot试验初步鉴定MAb4C5的抗原表位区为"Y175QQTDEANKWISMG188"。为精确其抗原表位区,合成了10条长度为15aa的多肽,利用ELISA准确的鉴定了MAb4C5的抗原表位区为"Q175TDEANKWIS186"。通过蛋白序列比对检验"Q175TDEANKWIS186"的保守性,结果表明该表位在不同源的A群RV之间是保守的,在PoRV不同血清型之间也是保守的。本研究制备了7株VP7蛋白单克隆抗体,并鉴定了一个B细胞抗原表位,为A群PoRV的检测及抗病毒免疫提供了有效信息和研究材料。对于利用SPF猪构建感染动物模型,并开展模型评价、探索致病机制等研究也非常重要。