基于星点设计的黄酮单体组合药物配伍优化研究

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目的:通过星点设计-效面优化法,考察银杏黄酮单体组合药物进行体外抗肿瘤作用(山奈酚、槲皮素、木犀草素)、抗缺氧损伤(槲皮素、芦丁、木犀草素)作用,探讨黄酮单体药物最佳组合比例,为提高组合药物的临床有效性提供科学方法和实验依据。方法:采用MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide)法计算细胞的存活率,分析测试被测样品的抗肿瘤作用和抗缺氧作用,运用生化检测法来进行细胞内脂质过氧化物丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平的检测。采用Design Expert软件,对实验结果建立二次回归数学模型预测。根据二项式拟合方程绘制的因素对指标影响的趋势的三维效应面和二维等高图,根据三维效应面和二维等高图选择最佳比例并进行实验验证,根据各实验数据对各指标进行偏差值的计算来说明建立的数学模型对实验结果预测准确度的大小。结果:在抗肿瘤实验中,木犀草素、槲皮素、山奈酚三种单体的联合使用具有对人卵巢癌(Skov3)协同增加抗肿瘤作用,预测值是(60.48%±5.87),实验测得值是(65.09%±5.28,64.61%±3.49)。通过星点设计20个实验组的交叉联合给药,三种单体联合使用对人乳腺癌(MCF-7)的抗肿瘤作用最高抑制率是80.52%,而木犀草素单体的抗肿瘤作用的抑制率是83.73%。由此可知,对于黄酮单体组合对乳腺癌的作用不如木犀草素的抗肿瘤作用。在抗氧化实验中,过氧化氢作用12小对后,绝大部分细胞已死亡或细胞活性降低,与氧化损伤组相比,给药保护组可维持较高的细胞存活率。三种单体也有一定程度的抗氧化作用,但是没有组合给药拮抗过氧化氢的氧化损伤强,预测值是(62.79%),实验测得值是(67.09%±6.28,68.61%±7.49)。生化指标检测,其中SOD值空白组(149.10±7.67)、氧化损伤组(34.43±5.67)、预测组(95.34±5.53); MDA值空白组(1.87±4.56)、氧化损伤组(3.65%±4.78)预测组(2.12±5.43)。结论:本课题采取星点设计-效面优化法建立实验模型,并运用此方法进行三因素五水平的黄酮单体组合药物抗肿瘤和抗氧化作用实验研究,简便易行,预测性良好,精确度较高。结果证实,星点设计-效面优化法在中药复杂实验研究中,具有可同时考察多因素多水平间相互作用,简化实验过程,提高实验精度等优势,有望为中药现代研究提供新的科学方法。
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