核酸适配子—多孔硅传感芯片非标记检测农产品中真菌毒素OTA和FB1的研究

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真菌毒素是农产品及饲料的主要污染物之一,对人和动物有致畸、致癌、致突变等毒性。然而,传统检测方法存在成本高、操作复杂、专业性强等不足,因此开发出一种简单、快速、经济、灵敏度高的检测方法具有重要意义。多孔硅有许多优良特性,非常适合用于生物传感领域。核酸适配子是一种新型识别分子,在真菌毒素的快速检测领域有着良好的应用前景。本文以多孔硅作为传感基底,核酸适配子为识别分子开发出了一种快速检测农产品中OTA和FBi的非标记生物传感芯片。本文主要研究内容概括如下:(1)通过电化学阳极氧化法刻蚀出了多孔硅。为了提高多孔层稳定性,在其表面旋涂了一层TiO2。SEM表征和反射干涉光谱图显示,Ti02均匀覆盖在了多孔层表面,并且良好地保留了原始的多孔结构。同时,研究了 TiO2表面修饰方法,结果显示醛基修饰效果要优于环氧基修饰效果。(2)通过对实验体系条件的优化,本文开发出了能够非标记检测OTA和FB1的核酸适配子-多孔硅生物传感器。利用傅里叶变换反射干涉光谱(FTRIFS),建立了对OTA和FBi的标准曲线,线性方程分别为:y=0.20526x-0.06639(R2=0.97331)和y=0.29912x-0.08663(R2=0.97699),线性范围分别为:1~1.OOng/mL 和 0· 1~100ng/mL,最低检出限分别为0.5ng/mL和0.05ng/mL。对大米、玉米和小麦进行回收率测定,结果显示:OTA为 68.06±5.48%~90.51±8.36%,FB1为66.18±6.02%~91.58±7.34%,并与ELISA方法作对照,结果相一致。(3)制备了核酸适配子-多孔硅2X2阵列芯片,在阵列不同传感位点分别偶联OTA和FB1核酸适配子,并借助傅里叶变换反射干涉光谱(FTRIFS),实现了对OTA和FB1的同时检测。建立了对OTA和FB1的多重检测标准曲线,线性方程分别为:y=0.18566x-0.08244(R2=0.98552)和y=0.2813x-0.01072(R2=0.97336),线性范围为:10~1OOng/mL和5~100ng/mL,最低检出限分别为:5ng/mL和1ng/mL。对大米、玉米和小麦进行回收率测定,结果显示:OTA为65.43±6.08%~87.76±7.29%和 FB1 为 64.85±6.08%~88.57±6.98%。
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