目的:胰岛素抵抗是肥胖症、2型糖尿病、代谢综合征等多种慢性疾病共同的病理基础,既往临床研究结果表明:运腹通经推拿法对上述疾病疗效显著,但其现代医学作用机制尚不明确,根据中医“脏腑-经络相关”理论,假设其可能机制与“能量代谢与传导”有关,尤其是与“SIRT1/PGC-1α”信号通路相关,通过运腹通经推拿法对模型大鼠的干预,揭示该手法对肥胖2型糖尿病胰岛素抵抗的作用机制。方法:1.采用“高脂高糖饲料联合小剂量STZ诱导”,建立肥胖2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型。经筛查确认造模成功后,把50只模型大鼠随机分为模型组、对照组、推拿1组、推拿2组、推拿3组,每组10只;同期购入普通饲料喂养未造模大鼠10只,为正常组。每周干预5天,共干预4周。观察各组大鼠一般状态,计算Lee’s指数。2.采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠空腹血糖、血脂、空腹胰岛素、瘦素、TNF-α、IL-6等指标,计算胰岛素抵抗指数、胰岛素敏感指数。3.采用HE染色法观察大鼠骨骼肌、脂肪组织、胰腺的形态学变化。4.采用Western Blot法、RT-PCR法检测信号通路相关的AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白和基因表达水平。结果:1.大鼠一般情况结果显示:(1)干预3周后,推拿2组、推拿3组进食量与正常组比较无显著差异(P>0.05),提示推拿可能有轻度的抑制食欲作用。(2)干预4周后,推拿2组大鼠体重开始与对照组、推拿3组出现显著性差异(P<0.05)。提示推拿有减重作用,且中等操作时间的手法效果优于其他两组。2.ELISA实验结果显示:(1)与模型组比较,干预4周后,对照组、推拿2组、推拿3组血糖水平明显下降(P<0.01);LSD法分析结果显示:对照组与推拿2组、推拿3组比较无显著性差异(P>0.05);推拿2组与推拿3组比较无显著性差异(P>0.05)。提示运腹通经推拿法可以降低血糖,其疗效与对照组相当。(2)干预4周后,与模型组比较,对照组、推拿2组、推拿3组空腹胰岛素水平明显下降,均具有极显著差异(P<0.01);LSD法分析结果显示:推拿2组与对照组比较有显著性差异(P<0.05);推拿3组与对照组比较无显著性差异(P>0.05);推拿2组与推拿3组比较有极显著差异(P<0.01)。提示运腹通经推拿法可促进胰岛素的利用,改善其代偿性分泌;且推拿2组疗效要优于对照组。(3)运腹通经推拿法可改善胰岛素抵抗指数,增强胰岛素敏感性、降低体重。(4)与模型组比较,治疗后对照组、推拿2组、推拿3组TC、TG、LDL-C水平显著下降,而HDL-C、FFA水平升高,具有极显著差异(P<0.01);LP、TNF-α、IL-6等细胞因子水平显著下降,具有极显著差异(P<0.01)。提示适当操作时间的运腹通经推拿法可改善脂代谢状态、改善模型大鼠炎症状态。3.HE染色结果显示:(1)正常组大鼠骨骼肌细胞数量正常,肌纤维呈长条状,平行排列,肌纤维内可见形态饱满椭圆形或圆形细胞核;模型组肌纤维走形紊乱,肌间隙变窄;推拿1组骨骼肌细胞形态与模型组类似;推拿2组、推拿3组和对照组骨骼肌细胞形态尚可,肌间隙增宽,但尚未恢复到正常组水平,且三组之间未见明显差异。(2)正常组肾周脂肪形态饱满,面积均匀,边界清晰;模型组脂肪细胞小而饱满,数量增多,平均面积较正常组较少;推拿1组脂肪细胞大小、形态接近于模型组;推拿2组脂肪细胞面积增大、视野内脂肪细胞数目较正常组减少;推拿3组与对照组接近,脂肪细胞大小介于正常组与模型组之间。(3)正常组大鼠胰岛细胞形态规则,呈椭圆形或圆形,胰岛内细胞、细胞核数目多,界限清晰。模型组、推拿3组胰岛细胞结构紊乱,形态不规则,胰岛面积缩小,胰岛内细胞、细胞核数目减少;推拿2组胰岛细胞萎缩情况较对照组和推拿1组明显好转,胰岛形态尚可,胰岛细胞体积增大,胰岛内细胞、细胞核数目增多;推拿1组、对照组胰岛整体形态和面积有一定恢复,但效果不及推拿2组。4.Western Blot结果显示:与模型组比较,对照组、推拿2组、推拿3组AMPK、SIRT1、PGC-1α蛋白表达水平显著提高,具有极显著差异(p<0.01);推拿1组与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。提示运腹通经推拿法可调节SIRT1/PGC-1α信号通路蛋白表达水平,改善胰岛素抵抗状态,其效果与对照组相当。5.RT-PCR结果显示:与模型组比较,对照组、推拿2组、推拿3组AMPK、SIRT1、PGC-1αmRNA表达水平显著提高,有极显著差异(p<0.01);推拿1组与模型组比较无显著性差异(P>0.05)。提示运腹通经推拿法可调节SIRT1/PGC-1α信号通路mRNA表达水平,改善胰岛素抵抗状态。结论:1.推拿手法存在“时-效关系”,中等操作时间的运腹通经推拿法在多个指标上体现出优于其他组别,表现出较好的临床效果,对临床制定推拿处方有一定参考意义。2.中等操作时间运腹通经推拿法可促进模型大鼠脂肪炎症因子表达,调整脂代谢,进而改善胰岛素抵抗状态。3.中等操作时间运腹通经推拿法可改善模型大鼠骨骼肌细胞含量,减少脂肪细胞数量,促进胰岛细胞修复等作用,进而调节能量代谢。4.中等操作时间运腹通经推拿法可能是通过改善模型大鼠炎症状态,调节脂代谢水平,进而激活骨骼肌AMPK,促进SIRT1蛋白和mRNA表达水平,进而上调下游信号因子PGC-1α蛋白和mRNA水平,即运腹通经推拿法可能通过SIRT1/PGC-1α信号通路改善胰岛素抵抗。