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2019年12月爆发的不明原因肺炎,因其高传染性严重危及人类健康安全,受到了社会各界的广泛关注。研究人员从感染者体内分离得到致病毒株之后,进一步解析其病毒结构,并完成其基因组序列的测定,确认该病毒隶属于冠状病毒家族。与另外两种感染人类的冠状病毒（SARS-CoV、MERS-CoV）相比,新型冠状病毒（SARS-CoV-2,2019-nCoV）具有更强的传染性,可以快速的在人群中传播,诱发了一场急性且发展迅速的全人类健康危机。作为一种高致病性的RNA病毒,新型冠状病毒若想实现在人群内的感染和传播,需要有效阻断宿主体内复杂的抗病毒免疫应答过程。并且在已有的研究中,对COVID-19患者的样本进行分析发现,与其他呼吸道病毒感染相比,感染新型冠状病毒的患者体内Ⅰ型和Ⅲ型干扰素的分泌显著降低,炎性细胞因子的分泌明显升高,这一现象表明新型冠状病毒可以有效调节宿主的天然抗病毒免疫系统。SARS-CoV-2作为一种RNA病毒,主要被机体的RIG-I样识别受体和TLR样识别受体所识别,进而影响宿主的天然抗病毒免疫系统。而且当机体发生病毒感染时,释放到宿主体内的病毒核酸可以有效诱导应激颗粒（SGs）的形成,SGs的产生能够进一步抑制病毒mRNA的翻译过程,进而阻断病毒在宿主体内的复制和繁殖。同时滞留在SGs中的病毒RNA进一步被募集到SGs中的模式识别受体所识别继而诱导宿主体内的天然抗病毒免疫应答,促进病毒的免疫清除。所以说SGs在机体抵抗病毒感染的过程中发挥着非常重要的作用,并且与宿主体内的天然抗病毒免疫应答存在紧密联系。现有的研究发现SARS-CoV-2编码的多种蛋白质可以通过不同的作用方式影响宿主体内的天然抗病毒免疫网络,其中部分蛋白可以通过多种不同的作用途径发挥其抑制宿主免疫应答的功能。然而,SARS-CoV-2编码的蛋白质是否可以通过调控机体的应激反应来实现免疫逃逸仍是一个未知数。有文献报道显示,质粒转染可以有效诱导SGs的形成,可以通过向细胞中转染表达病毒蛋白的质粒,然后通过免疫荧光染色的方法来观察各病毒蛋白是否影响SGs的形成。因此,本实验首先采用这种实验方法筛选发现了SARS-CoV-2编码的蛋白质中可以影响SGs形成的相关基因,随后又进一步研究了这两种基因在SARS-CoV-2感染过程中对固有免疫应答的影响。在本研究中,我们将SARS-CoV-2编码的各种蛋白质的表达载体转染到HeLa细胞中,之后通过免疫荧光技术观察新型冠状病毒编码的各种蛋白对SGs形成的影响。结果显示当用SARS-CoV-2编码蛋白NSP5或N的表达载体转染细胞时,可以明显抑制细胞中SGs的形成。之后通过荧光显微镜、流式细胞术以及空斑实验三种实验方法检测了NSP5和N在病毒感染中的作用,发现NSP5或N的表达均可以有效促进病毒的复制。随后我们又通过qRT-PCR的方法检测了 NSP5和N的表达是否影响IFNs-Ⅰ、IFNs-Ⅲ以及ISGs的合成。结果显示,NSP5或N蛋白的表达均可以有效削弱由SeV和poly（I:C）刺激诱导的IFN-β、IFN-λ1、ISG56以及CXCL10的表达。同时,我们通过免疫印记实验检测发现NSP5或N的表达可以显著抑制RLRs信号通路中下游信号分子TBK1和IRF3磷酸化,以及IRF3的入核。进一步的机制研究发现,NSP5和N均通过多种途径抑制机体的抗病毒免疫。我们通过Western Blot及免疫荧光实验检测发现NSP5与N均可以通过与G3BP1相互作用,阻断SGs的形成。同时我们将NSP5或N与RLRs信号通路中各接头分子共同转染,随后通过免疫共沉淀或者免疫荧光的方式检测发现无论是NSP5还是N均与RIG-I、MDA5存在相互作用;之后又利用报告基因的方法检测发现NSP5的表达可以有效降低RIG-I、MDA5介导的信号通路的活化;而N的表达并不影响任何接头分子诱导的信号通路的活化,这一结果提醒我们NSP5可能在RIG-I的上下游发挥作用,而N可能作用于RIG-I的上游。之后我们又通过免疫共沉淀的方法检测发现NSP5的表达可以显著抑制RIG-I与MAVS以及TRIM25与RIG-I之间的相互作用,进而影响机体的抗病毒免疫过程。之后我们又通过进一步的研究发现N蛋白不仅可以通过与RLRs信号通路的辅因子PACT相互作用抑制PACT对该信号通路活化的促进作用,另外还通过影响TRIM25与RIG-I之间的相互作用进而抑制机体的抗病毒免疫应答。因为从结构上看N含有两个RNA结合基序,所以我们又通过进一步的实验发现N的表达可以有效抑制RIG-I识别RNA的能力,进而影响下游信号通路的活化。总而言之,NSP5和N不仅影响应激颗粒的形成,同时还通过影响RLRs信号通路的不同阶段影响其活化,抑制该信号通路中下游信号分子的磷酸化以及IRF3的入核,进而抑制干扰素的分泌。在这项研究中,我们首次发现SARS-CoV-2编码的NSP5和N蛋白可以有效抑制抗病毒应激颗粒（avSGs）的形成,促进病毒的复制,进一步阐明了 N或NSP5抑制机体抗病毒免疫的具体作用机制。同时这项研究还揭示了 SARS-CoV-2、应激反应和抗病毒天然免疫之间的作用关系,有助于进一步揭示COVID-19的致病机制。创新性:1.本研究发现SARS-CoV-2编码的NSP5及N蛋白可以通过影响SGs的形成显著抑制机体的抗病毒能力。2.NSP5对SGs形成的抑制作用并不依赖其剪切酶活性,同时NSP5还可以通过影响RLRs信号通路中的多个步骤抑制其活化。3.SARS-CoV-2编码蛋白N通过调控SGs的形成抑制RLRs识别受体的辅助因子（PACT、G3BP1）所诱导的该信号通路的活化。