p38丝裂酶原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）是一类能被细胞外不同刺激所激活的丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶,位于众多细胞信号通路的中枢位置,在先天免疫反应中发挥重要作用。罗非鱼（Oreochromis）是联合国粮农组织（FAO）重点推荐养殖的水产品之一,具有一定的经济价值,对我国水产养殖业发展起到重要的作用。然而近年来以无乳链球菌为主的链球菌病大规模暴发,严重影响了罗非鱼养殖业的发展。因此,开展罗非鱼免疫防御体系应答机理以及免疫相关功能的研究,从本质上提高罗非鱼的抗病能力和机体免疫功能,选育抗病性强的优良品种,成为当前罗非鱼养殖业最迫切的需要。目前国内外研究表明奥尼杂交鱼的抗病、抗逆性能强于其亲本,本论文以尼罗罗非鱼及奥尼罗非鱼p38MAPK为研究对象,利用cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）,生物信息分析,实时荧光定量PCR等技术手段进行分析,得到以下研究成果:1.尼罗罗非鱼p38MAPK基因克隆与序列分析本实验运用RACE技术克隆获得尼罗罗非鱼埃及品系p38MAPK的cDNA全长序列。该序列全长1789bp,开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）长1086bp,5’非编码区（Untranslated Region,UTR）长 342bp,3’ UTR 为 361bp。ORF 编码 361 个氨基酸,预测分子量为41.598kD,理论等电点为5.10,序列含有TGY双磷酸化位点以及底物结合位点ATRW。通过序列比对及同源性分析发现,p38MAPK与其他物种的相似性都在70%以上。系统进化树分析,尼罗罗非鱼p38MAPK与大黄鱼、鲈鱼亲缘关系最近。2.尼罗罗非鱼p38MAPK基因组织表达分析利用实时荧光定量PCR技术检测了p38MAPK基因在尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、头肾、体肾、鳃、肠、肌肉、脑、心脏、血液、精巢等11个组织中的表达情况。结果显示,p38MAPK在所选组织中均广泛表达,且各组织中的相对表达量显著不同。其中,肌肉中p38MAPK基因的转录水平最高（为头肾中相对表达量的6.9倍）（P＜0.05）,其次是心脏、肝脏、血液、脑、精巢、鳃、体肾、脾脏、肠,头肾中相对表达量最低。3.无乳链球菌感染后尼罗罗非鱼p38MAPK及相关因子的表达分析利用实时荧光定量PCR技术分析了无乳链球菌感染后不同时间点（0h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、240h）尼罗罗非鱼肝脏、脾脏、头肾等免疫组织中p38MAPK以及下游因子NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-10基因的mRNA水平变化。结果显示,无乳链球菌感染后p3MAPK转录水平出现显著变化。肝脏中p38MAPK转录水平在感染后12h达到峰值,为对照组的3.8倍（P＜0.05）,脾脏、头肾中在2h达到最大值,分别为对照组的1.6倍、1.9倍（P＜0.05）,感染24h-240h后逐渐趋于平稳,暗示p38MAPK在尼罗罗非鱼抵抗链球菌侵染过程中发挥重要作用。下游因子NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-10基因的转录水平总变化趋势与p38MAPK的相似,均呈现先上调后下降的变化趋势。其中IL-1β在肝脏、脾脏中的转录水平的变化均较其他因子显著,最大值分别达到对照组的63.5倍和58.3倍（P＜0.05）;IL-10的转录水平在所有检测时间点却显著低于对照组。TNF-α在头肾中的转录水平较其他因子显著,达到对照组的36.9倍（P＜0.05）;IL-10基因的转录水平在24h达到对照组的4.8倍（P＜0.05）。随后各基因mRNA水平趋于平稳。推测p38MAPK与NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-10存在正相关关系,p38MAPK可能通过调节NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-10的表达参与尼罗罗非鱼抗链球菌侵染过程。4.无乳链球菌感染后奥尼罗非与尼罗罗非鱼p38MAPK及相关因子表达的差异采用实时荧光定量PCR技术对无乳链球菌感染过程中（0h、2h、4h、8h、12h、24h、48h、72h、240h）奥尼罗非鱼与尼罗罗非鱼肝脏、头肾组织中p38MAPK以及NF-κB、IL-1β、TNF-α和IL-10的转录水平进行比较。结果显示,无乳链球菌感染后,奥尼罗非鱼和尼罗罗非鱼肝脏中p38MAPK的相对表达量显著上调,且感染前后差异不显著。其下游因子NF-κB、TNF-α在头肾中的转录水平显著低于尼罗罗非鱼,但变化幅度不显著。IL-1β在肝脏中的mRNA水平上调幅度显著低于尼罗罗非鱼,IL-10在肝脏中的转录水平感染后显著高于尼罗罗非鱼。推测奥尼罗非鱼能更好的调控机体的炎症反应,表现出明显的杂交优势。