子宫内膜异位症(endometriosis,内异症)是指子宫内膜在子宫腔以外的部位出现、生长、浸润、周期性出血,或引起疼痛、不育及结节包块等。近年来此病的发病率不断上升,已成为第二位的妇科常见多发病。此病性质良性而行为类似恶性疾病。内异症自1860年首次发现至今发病机制仍不清楚,造成此病治疗的困难,临床处理十分棘手。因此对内异症发病机制的深入研究,寻找新的、提高疗效的治疗方法十分必要。目前内异症的发病机制仍以内膜细胞随经血逆流种植为主导理论,近年来的研究认为内异症是一种典型的炎症相关性疾病。腹腔局部微环境炎症反应对异位子宫内膜细胞的种植和增殖起非常重要的作用。核因子кB(NF-кB)是细胞内普遍存在的重要转录因子,是多条信号转导途径的交汇点,广泛参与机体免疫、炎症、应激反应等生理及病理过程。NF-кB可高效诱导多种前炎性细胞因子(包括TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8)、白细胞粘附分子、单核细胞趋化因子等基因的表达,同时对参与炎症级联及放大效应的多种酶的基因转录也具有重要的调控作用。NF-кB的过度激活可引起一系列炎症相关性疾病,如哮喘、类风湿性关节炎、肠炎、癌症等,已经引起人们的高度重视。目前国内外关于NF-кB在内异症发病机制中作用的研究甚少。本课题通过体外分离培养内异症患者的异位、在位及非内异症患者的在位内膜腺上皮细胞及间质细胞,观察前炎性细胞因子TNF-α对各组内膜间质细胞增殖的影响,及其影响与细胞内NF-кB的活化、分泌IL-8的情况之间的关系,NF-кB信号传导阻断剂TPCK和抗IL-8的抗体对TNF-α作用的影响。为进一步阐明NF-кB在内异症发病机制中的作用及探索内异症新的生物治疗提供理论依据。第一部分分离纯化及体外培养人异位及在位子宫内膜细胞目的:建立分离纯化及体外培养内异症患者的异位、在位及非内异症患者的在位子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞的方法。方法:通过酶解、筛网过滤、传代及贴壁纯化等技术,分离20例内异症患者的异位、在位及20例非内异症患者的在位内膜腺上皮细胞及间质细胞。结果:内异症及非内异症在位内膜分离培养的成功率明显高于内异症异位内膜(P<0.05)。内异症异位内膜培养成功率低主要与取材有关,标本应尽量取自囊壁新鲜出血区及血管丰富处的内衬组织。经筛网分离及传代能明显提高间质细胞的纯度。经筛网分离及贴壁纯化能明显提高腺上皮细胞的纯度。结论:通过酶解、筛网过滤、传代及贴壁纯化等技术能够获得高纯度的内膜腺上皮细胞及间质细胞。