论文部分内容阅读
目的 研究佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-Acetate, PMA)对T辅助细胞(Th)表面CD4分子表达的影响,建立流式细胞仪三色法检测外周血Th细胞亚群的方法及合适的质量控制方案;检测食管鳞癌患者Th细胞亚群的变化和围手术期接受同种输血对食管鳞癌患者手术后Th细胞亚群的影响。 方法 用荧光标记的抗CD3/4/8抗体同经不同浓度的PMA和1μg/mL的Ionomycin刺激培养2、3、4 h的正常人外周血中的T细胞表面上相应的抗原分子相结合,溶血后用流式细胞仪检测CD4通道(Th细胞)的荧光强度;外周血用RPMI1640培养液和终浓度为25ng/ml的PMA、1μg/ml的Ionomycin、20ng/ml的Monensin培养2 h并固定和破膜后,加入荧光标记的CD4、IFN-γ和IL-4抗体同含相应抗原的细胞相结合,用流式细胞仪检测Th0、Th1和Th2细胞;用CD69作为淋巴细胞激活的指标,MPO作为评价通透剂作用效果的指标,建立Th细胞亚群检测的质量控制方法;利用上述方法测定健康对照组、食管鳞癌患者组、围手术期接受同种输血的食管鳞癌患者组和围手术期未接受同种输血的食管鳞癌患者组的术前和术后5天外周血Th细胞亚群。 结果 培养后CD4通道的平均荧光强度(MFI)随PMA质量浓度的升高和刺激时间的延长而降低,25ng/ml的PMA刺激培养2 h,CD4~+细胞与CD4~-细胞能明显区分,CD3~+细胞90%以上都表达CD69,通透剂作用后90%以上的粒细胞MPO~+;优化出终浓度为25ng/ml的PMA、1μg/ml的Ionomycin、20ng/ml的Monensin培养2 h的培养方案,成功建立流式细胞仪CD4、IFN-γ和IL-4三色法检测Th细胞亚群的方法;发现食管鳞癌患者组外周血Th0、Th1和Th2细胞均显著低于对照组