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TMVCP由158个氨基酸残基组成,其中第153~158位是本实验室常用的外源肽段替代区域。在本实验室的前期工作当中,在本实验室的前期工作当中,采用外源肽展示系统的策略构建了一株重组病毒TMV-S6-1,并利用该病毒在烟草中成功地表达了一段外源多肽——S6-1(SARS病毒表面蛋白上的一段长为12个氨基酸的肽段)。
为了比较野生型TMV的外壳蛋白wtCP与TMV-S6-1的融合外壳蛋白CPS6-1的包装能力及粒子的感染能力,我们将从体内与体外两个方面进行研究:将重组病毒TMV-S6-1与野生型TMV混合感染Nicotianatabacumcv.Samsunnn烟草上;与此同时,将重组病毒TMV-S6-1与野生型TMV各自的CP按比例与TMV的RNA混合,进行体外包装。
混合TMV粒子共感染烟草后,我们发现重组病毒TMV-S6-1虽然被组装,但是却不再具备系统感染的能力。分析其原因,我们认为这可能是由于病毒之间排外机制的作用,使得单独感染敏感型烟草时可以正常远距离传播的TMV-S6-1在与wtTMV共感染时丧失了系统感染的能力。
使用免疫金标记电镜技术观察TMV粒子在体内与体外的包装状况,免疫金标记所使用的第一抗体分别为anti-CP153~158、anti-S6-1。这两种抗体由家兔抗血清——anti-wtCP和anti-CPS6-1经交叉吸附实验,屏蔽掉抗血清中烟草蛋白的抗原决定簇及CP152上游的抗原决定簇得来,检验结果显示它们的特异性较高,效价都为1:2500。
免疫金标记电镜观察实验的结果显示,体外包装得到的混合病毒粒子溶液中wtTMV与TMV-S6-1占了总数的94%左右,它们所占的比例接近1:1,不同于体内系统的是它还存在约6%由两种CP共同包装得到的粒子。这说明融合了外源肽S6-1的外壳蛋白CP亚基构向的变化,对其装配TMV病毒粒子所产生的影响不是很大,它仍具有正常的组装能力,且由绝大多数粒子为单一CP体外包装而来的现象可知,包装时外壳蛋白之间的聚集及其组装成粒子的过程具有高度的选择性。并推论由于两种外壳蛋白的同型性,造成一定概率的共同包装。