棕榈酸经PPARα调控SR-BI影响卵巢颗粒细胞脂质蓄积

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背景:多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是一种女性常见的代谢性疾病,其主要的临床特征包括高雄激素血症、持续无排卵、卵巢多囊样改变。大量研究发现,80%的多囊卵巢综合征患者伴随着脂质异常,其中,棕榈酸(palmitic acid,PA)的浓度在血液和卵泡液中也增加,棕榈酸浓度的增加引起颗粒细胞脂质毒性,但棕榈酸是否促进颗粒细胞脂质蓄积尚不明确。B类I型清道夫受体(scavenger receptor class B type I,SR-BI)是细胞上的膜受体,主要参与脂质转运,SR-BI的表达变化与不孕密切相关。此外,在肝细胞中,过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptorα,PPARα)调控SR-BI的表达,而在颗粒细胞中脂质代谢异常与PPARα/SR-BI的关系还尚不清楚。目的:本研究旨在探讨棕榈酸通过PPARα调控SR-BI影响卵巢颗粒细胞脂质蓄积的作用。方法:1.人卵巢颗粒细胞(KGN)用含有10%胎牛血清的DMEM培养液于37°C、5%CO2培养箱中静置培养,不同浓度(0,100,200,300μmol/L)的棕榈酸处理24 h,油红O染色观察细胞内脂滴数量,NBD-Cholesterol荧光标记表示细胞内胆固醇含量;Western-blot、免疫细胞化学和免疫荧光分别检测细胞PPAR-α,SR-BI蛋白质的表达。2.干预SR-BI后,采用油红O染色和NBD-Cholesterol荧光标记观察细胞内脂质含量。3.干预PPAR-α,采用油红O染色和NBD-Cholesterol荧光标记观察细胞内脂质含量,Western-blot、免疫细胞化学和免疫荧光检测卵巢颗粒细胞SR-BI表达。结果:1.不同浓度棕榈酸处理后,与对照组相比,颗粒细胞内脂质含量增加,且呈浓度依赖性;与对照组相比,颗粒细胞SR-BI的表达上调,且呈浓度依赖性(P﹤0.05);与对照组相比,颗粒细胞PPARα的表达上调,仅在200、300μmol/L棕榈酸处理组有统计学意义(P﹤0.05)。2.SR-BI抑制剂BLT-1处理后,与对照组相比,棕榈酸组颗粒细胞内脂质含量增加,与棕榈酸组相比,棕榈酸与BLT-1共孵育组颗粒细胞脂质含量减少。3.PPARα抑制剂GW6471处理后,与对照组相比,棕榈酸组颗粒细胞内脂质含量增加,与棕榈酸组相比,棕榈酸与GW6471共孵育组颗粒细胞内脂质含量减少;与对照组相比,棕榈酸组颗粒细胞SR-BI的表达上调(P﹤0.05);与棕榈酸组相比,棕榈酸与GW6471共孵育组颗粒细胞SR-BI的表达下调(P﹤0.05)。结论:1.棕榈酸促进卵巢颗粒细胞脂质蓄积;2.PPARα介导棕榈酸调控SR-BI蛋白的表达影响卵巢颗粒细胞脂质蓄积。
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