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本课题研究了烟草多酚的提取纯化工艺,对烟叶中多酚各组分进行了结构鉴定,探讨了烟叶多酚对卷烟烟气气相自由基的祛除效果,研究了烟叶多酚类物质的抗氧化性能和免疫活性,对烟叶多酚主要组分绿原酸进行了包合修饰,研究包合工艺条件,利用UV、DSC和1H NMR验证包合物的形成,探讨包合修饰对绿原酸抗氧化抑菌能力和稳定性的影响。
以总多酚提取率和抗氧化活性为指标,通过单因素实验及响应面分析法,确定了对总多酚提取率和抗氧化活性影响显著的四个因素(超声时间、浸提温度、乙醇浓度和液料比),建立了该指标与四个因素间的数学模型,并得出烟草多酚最佳提取工艺参数为:提取温度52℃、超声时间48 min、乙醇浓度60%、液料比20:1,在该条件下的总多酚得率为29.43mg/g,还原力为1.219。以大孔吸附树脂纯化烟草多酚,筛选出对烟草多酚吸附性能较好的大孔吸附树脂为AB-8型树脂,该树脂对烟草多酚吸附量大,解吸率高,选择性好。采用AB-8树脂吸附分离烟草多酚时,70%乙醇浓度沈脱产物纯度最高,达到80%以上。
对不同类型、不同部位烟叶及不同等级、不同类型卷烟的多酚含量进行了测定比较,结果表明烤烟烟叶的多酚类物质含量最高,白肋烟中多酚含量相对较低,香料烟多酚含量居中,烟叶中酚类物质的含量因着生部位不同而存在差异,中上部叶多酚含量相对较高,下部叶多酚含量最低。在不同质量等级的烤烟型卷烟中,多酚含量随着卷烟档次的升高而增加,多酚物质的含量在一定程度上反映了烤烟型卷烟的内在质量。烤烟型卷烟中的多酚含量高于混合型卷烟。烟叶多酚提取物具有良好的清除烟气自由基效果,加入滤嘴及烟丝中均可降低烟气自由基含量,加入滤嘴中降低效果略高于加入烟丝中。
根据紫外-可见光吸收光谱(UV)、红外光谱(IR)、高效液相色谱-光电二极管阵列检测器-电喷雾质谱(HPLC-PDA-ESI/MS),1H和13C核磁波谱(NMR)的分析,鉴定出烟叶中多酚各组分分别为:新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、莨菪亭、芸香苷和槲皮素,其中含量最高的组分为绿原酸,其次为芸香苷。
采用体外实验方法,分析烟草多酚各在DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基体系,还原力,鼠肝匀浆体系的脂质过氧化反应的抗氧化活性。结果表明,烟草多酚各组分都有较强的自由基清除活性,其中绿原酸、咖啡酸和槲皮素清除能力最强。各组分多酚均能抑制脂质过氧化,其中槲皮素的抗脂质过氧化能力最强。对烟草多酚促进免疫细胞增殖进行了研究,免疫细胞增殖试验结果表明,烟草多酚及其主要化学组分对淋巴细胞增殖都有促进作用。对烟草多酚主要组分绿原酸进行环糊精包合修饰,得出最佳包合工艺参数为:包合物主客分子比为10:1,搅拌温度40℃,搅拌时间9h。根据UV、DSC和1H NMR的波谱分析,证明包合物已形成。实验证实绿原酸包合物的稳定性比绿原酸大为提高,抗氧化能力和抑菌性与绿原酸无显著差异。