基于HSP70/NF-κB通路健脾清化汤治疗Hp相关性胃炎大鼠的机制研究

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目的:观察不同浓度健脾清化汤干预前后幽门螺杆菌相关性胃炎(Helicobacter pylori associated gastritis,HAG)大鼠一般情况影响、13C尿素呼气试验,以及大鼠模型胃黏膜上皮组织病理改变,HSP70、NF-κ Bp65的表达,探讨健脾清化汤治疗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)相关性胃炎的可能机制。方法:(1)实验过程:选用健康雄性SD大鼠66只,随机平均分为6组,空白组、模型组、替普瑞酮组(西药组)、健脾清化汤高剂量组、健脾清化汤中剂量组、健脾清化汤低剂量组。除空白组,其余5组均采用Hp菌液(109CFU/ml)灌胃的方法,建立HAG模型。连续菌液灌胃5次后,采用13C呼气试验检测方法检测BOD值变化,造模成功后予替普瑞酮、不同浓度健脾清化汤灌胃治疗1月,治疗结束后取材。(2)检测指标:光镜下HE染色观察胃粘膜组织病理学改变,免疫组化染色检测胃粘膜上皮细胞HSP70、NF-κ Bp65蛋白表达结果。结果:(1)健脾清化汤高、中、低剂量组以及西药组大鼠一般情况得到改善。(2)13C呼气试验:造模后大鼠DOB值明显高于造模前和空白组DOB水平,差异有统计学意义(P<0.05)。给药1个月后,模型组与西药组及各中药组比较有统计学意义(P<0.05),西药组及中药组平均DOB值均有所下降。中剂量组较高、低剂量组具有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色:模型组较空白组损伤明显;西药组及中剂量中药组较模型组损伤改善。模型组完整胃粘膜上皮细胞数量较正常组减少;西药组及高、中剂量中药组完整细胞数量高于模型组;(3)NF-κ Bp65免疫组化染色:空白组大鼠胃黏膜NF-κ Bp65呈阴性或极少量阳性表达,主要表达于细胞质;相比于空白组,模型组NF-κ Bp65表达于细胞质和细胞核,表现为深棕色,散在分布于细胞质及细胞核,蛋白表达水平明显升高,平均光密度值最高;西药组及健脾清化汤高、中剂量组NF-κ Bp65表达于细胞质、细胞核,少部分表现在胞核,平均光密度较低剂量中药组降低,低剂量中药组NF-κ B主要表达于细胞质,少部分表现在胞核,较模型组稍低;健脾清化汤低、高、中剂量组阳性细胞平均光密度依次降低。西药组及健脾清化汤高剂量组、中剂量组AOD数值均较模型组降低;健脾清化汤低剂量组较模型组AOD数值稍有降低。HSP70免疫组化染色:空白组大鼠胃黏膜HSP70少量阳性表达,主要表达于细胞质中,少见与细胞核,表现为浅棕色;相比于空白组,模型组HSP70极少量表达,极少见于散在分布细胞质中,平均光密度值各组最低;西药替普瑞酮组HSP70表达呈强阳性,分布于细胞质及细胞核中,表现为深棕色,蛋白表达水平明显升高,平均光密度值高;健脾清化汤中剂量组HSP70主要表达于细胞质及胞核中,平均光密度数值较西药组未见较大差异;健脾清化汤高剂量组及低剂量组HSP70主要表达于细胞质,少部分表现在胞核,表现为棕色,平均光密度较空白组未见较大变化;健脾清化汤低、中、高剂量组阳性细胞平均光密度由高至低依次为健脾清化汤中剂量组、高剂量组、低剂量组。模型组较空白组AOD数值降低;西药组及健脾清化汤高、中、低剂量组AOD数值均较模型组升高。结论:健脾清化汤在改善SD大鼠一般情况的同时可一定程度抑杀Hp,原本因Hp感染被抑制的HSP70或可在健脾清化汤作用下得到恢复,HSP70表达使得NF-κ B的表达受到抑制,从而减轻炎症反应的进展,减轻胃组织损伤以保护胃组织。
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