人巨细胞病毒(HCMV)是胎儿宫内感染和围产期感染的重要病原,以及因免疫抑制剂、器官和骨髓移植、艾滋病等所致免疫低下患者患严重感染的重要病原体之一,妊娠妇女感染HCMV可通过胎盘传染给胎儿,导致胎儿发育迟缓、畸形、低体重儿、黄疸、皮疹等。HCMV也是器官移植失败和艾滋病病人并发感染死亡的主要原因,对非免疫缺陷者常导致长期隐性感染或出现非特异症状,甚至引起感染细胞的转化、畸变或癌变,同时也与多种肿瘤的发生相关,如宫颈癌、前列腺癌、结肠癌及卡波济肉瘤。 HCMV主要糖蛋白gB广泛表达在病毒颗粒及感染细胞表面,具有被病毒中和抗体识别的抗原表位,能特异性的诱导机体的免疫反应,因此被认为是HCMV疫苗的重要候选蛋白,制备巨细胞病毒gB疫苗,对于巨细胞病毒感染所诱发的疾病可起到积极的防治作用。 目前许多抗病毒药物对HCMV感染引起的相关疾病有较好的疗效,但对需要长期维持治疗的病人常产生耐药现象,且均存在不同程度的毒性作用,给临床治疗带来困难。因此,研制新型抗HCMV药物,对于HCMV感染引起的相关疾病的治疗是非常必须的。 研究内容: 一、HCMV主要包膜糖蛋白gB疫苗的构建及免疫原性检测 1.利用分子生物学技术构建构建人巨细胞病毒(HCMV)包膜糖蛋白gB真核基因表达载体pCMV.gB。 2.初步评价其作为核酸疫苗在小鼠体内的免疫效果 通过皮下接种免疫小鼠,测量小鼠的体温、体重等一般情况,利用LDH释放试验检测免疫小鼠的NK细胞活性,MTT法检测T细胞增殖活性、IL-2活性,ELISA方法检测小鼠的抗HCMV IgM、IgG抗体及IL-2、IL-4含量。 实验结果显示:成功构建gB表达载体pCMV.gB,用其免疫小鼠后,