目的本研究目的在于探讨三七叶叶苷提取物(PPD-25-OH)对高糖(high glucose,HG)诱导的肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMCs)肥大的影响,并在体水平观察该药对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DNP)大鼠的肾功能的改善,对炎性趋化因子的影响,以初步阐明PPD-25-OH对DNP的保护作用的可能相关炎症机制。方法第一部分以高糖诱导的肥大的GMCs为模型,将培养的GMCs细胞随机分为五组,分别包括空白对照组(NG)、高糖诱导模型组(HG)和PPD低、中、高浓度组别。各组给予不同处理因素后,观察不同浓度PPD-25-OH对HG诱导的GMCs的体积的大小、存活率和总蛋白量的影响。另外,采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunoabsorbent assay,ELISA)测定细胞内炎症因子的含量变化,包括测定白细胞介素-6(interleukinin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及基质细胞衍生因子-1(stromal cell derived factor-1,SDF-1)、环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的含量,采用蛋白质印迹法(western blotting)检测各组细胞丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine threonine protein kinase,AKT)和p-AKT的蛋白表达水平。第二部分,采用大鼠糖尿病肾病模型,给予不同剂量PPD-25-OH,以进一步测定PPD-25-OH对一般状态、肾功能、肾脏病理形态的保护作用。另外采用western blotting法观察PPD-25-OH对单核细胞趋化因子(Monocyte chemotactic factor,MCP-1)及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达影响,初步探讨三七叶苷对糖尿病肾脏的保护作用可能机制。结果在离体实验结果中发现,HG诱导后组的GMCs细胞体积增大、细胞存活率下降、GMCs内总蛋白含量增加,HG组与NG组比较,上述实验结果均具有显著性差异(P<0.05)。给予不同浓度的PPD-25-OH处理后,GMCs体积明显缩小、细胞存活率升高、细胞内总蛋白含量减低,与HG组相比,具有显著性差异(P<0.05)。另外,不同浓度的PPD-25-OH处理后,降低炎症因子IL-6及TNF-α和炎性趋化因子SDF-1、COX-2的含量,与HG组相比,具有显著性差异(P<0.05)。Western blotting显示,与NG组相比,HG组和PPD不同浓度的组P-AKT表达均下降,差异具有显著性(P<0.05)。与HG组相比,PPD不同浓度的组P-AKT表达升高,差异具有显著性(P<0.05)。在体实验研究结果表明,不同剂量PPD-25-OH均能降低糖尿病肾病的血糖、尿蛋白、尿素氮和肌酐含量,与糖尿病肾病模型组相比,具有显著性差异(P<0.05)。不同剂量PPD-25-OH均能降低肾脏指数,改善肾脏的病理结构。另外,与DNP模型组相比,不同剂量PPD-25-OH均能降低肾脏中MCP-1和CTGF的蛋白表达,具有显著性差异(P<0.05)。结论1.不同浓度的PPD-25-OH均能减少肾小球系膜细胞内的总蛋白含量,降低细胞体积和提高存活率,证明其对DNP具有保护作用。2.不同浓度的PPD-25-OH能降低炎症因子IL-6及TNF-α和炎性趋化因子SDF-1、COX-2的含量,降低AKT的表达,增加P-AKT的表达,其可能通过下调多种炎症因子和炎性趋化因子水平,发挥防治DNP的作用。3.不同剂量的PPD-25-OH均能降低血糖、尿蛋白、尿素氮和肌酐含量,能改善糖尿病肾病大鼠的肾功能,降低肾脏指数,改善DNP大鼠的肾脏病理改变,抑制肾脏的肥厚。4.不同剂量的PPD-25-OH能降低炎性趋化因子MCP-1和CTGF的表达,提示其机制可能通过下调炎性趋化因子表达,发挥防治DNP的作用。