家鸡胚胎早期发育过程中DNA甲基化的MSAP分析

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表观遗传学即没有DNA序列变化的、可遗传的基因表达改变。DNA甲基化即为表观遗传中的一个重要组成部分。现有研究表明,DNA甲基化水平在胚胎发育中存在一个变化过程,并且会影响如性状分化等胚胎发育过程中的重要进程。通过MSAP(甲基敏感扩增片段多态性(methylation sensitive amplified polymorphism)技术分析家鸡胚胎发育过程中的甲基化位点变化,首先能够将这一方法应用于家禽胚胎发育分析,得到表观遗传学变化的重要信息,其次,能首次得到家鸡胚胎的基因组甲基化程度变化趋势以及不同组织器官间甲基化程度差异等数据。通过这一过程,可以揭示家鸡胚胎发育过程中DNA甲基化的动态变化规律和器官发育变化间可能存在的关系,为进一步研究影响经济性状的DNA甲基化变化或者其他表观修饰打下基础。本研究以不同时间段的家鸡胚胎为试验材料,提取基因组DNA,采用MSAP对其甲基化水平进行了初步检测:共计发现甲基化位点880个,不存在单链外侧和双链内测甲基化位点1332个。结果显示CCGG位点单链外侧的胞嘧啶甲基化位点比例为20.48%,双链CCGG位点的内侧胞嘧啶甲基化19.30%,两者总比例为39.78%,其中3天时期甲基化比例为32.96%,7天时期甲基化比例为38.48%,12天时期甲基化比例为39.45%,15天时期甲基化比例为47.73%。可以看出,该甲基化变化是随着胚胎发育而呈升高趋势。本研究以15天不同组织器官的家鸡胚胎为试验材料,提取基因组DNA,采用甲基敏感扩增片段多态性对其甲基化水平进行了初步检测:共计发现甲基化位点1379个,不存在单链外侧和双链内测甲基化位点1553个。结果初步显示CCGG位点单链外侧的胞嘧啶甲基化位点比例为23.67%,双链CCGG位点的内侧胞嘧啶甲基化23.36%,两者总比例为47.03%。其中胸肌组织甲基化比例为47.73%,心脏组织甲基化比例为42.74%,肺脏组织甲基化比例为39.45%,肾脏组织甲基化比例为46.64%,肝脏组织甲基化比例为52.48%。可以看出,肝脏组织甲基化比例较高而肺脏较低,其它较为接近。总体来说,家鸡胚胎甲基化程度随时间发育呈现递增趋势:其中从12天到15天日龄时甲基化变化程度比较高,而在5到12天期间是甲基化程度变化不明显。同时,家鸡胚胎甲基化呈现较高的组织特异性差异,其中肝脏部分甲基化程度较高,肺脏组织较低,其它部分则较为接近。胚胎甲基化的时间线变化和胚胎体重增加相符,胚胎甲基化的组织特异性变化也符合胚胎的器官发育的动态过程。并且也证实甲基化高峰期很可能出现在胚胎形成桑葚期,随后甲基化过程仍然是伴随胚胎发育而变化的,并且存在组织特异性。
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