【摘 要】
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目的:在体外培养条件下观察低氧浓度对小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)增殖的影响,并探索其作用机制,以寻求这种成体干细胞体外扩增的适宜氧浓度。方法:设
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目的:在体外培养条件下观察低氧浓度对小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)增殖的影响,并探索其作用机制,以寻求这种成体干细胞体外扩增的适宜氧浓度。方法:设置1%O2组(低氧组)和18%O2组(常氧组),用小鼠骨髓细胞做MSC集落形成实验,计算集落的形成率和平均面积;进行低氧组和常氧组MSC传代细胞的扩增培养,用显微技术做细胞形态学观察、细胞计数和分裂指数检测,用CCK-8法测定细胞活力,用流式细胞术做细胞周期分析和细胞凋亡率检测,用ELISA法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平,用免疫细胞化学染色法检测细胞增殖核抗原(PCNA)和P53蛋白表达水平。结果:低氧组MSC集落生成率显著低于常氧组,平均集落面积也小于常氧组,但无统计学显著性。与常氧组相比,低氧组MSC传代细胞的HIF-1α蛋白表达水平显著升高。MSC传代细胞在低氧条件下培养72h后,细胞计数减少,低氧组与常氧组的差异具有显著性意义。低氧组MSC传代细胞的分裂指数显著低于常氧组。低氧组MSC传代细胞的CCK-8实验吸光值略低于常氧组,但差异无显著性意义。与常氧组相比,低氧组MSC传代细胞的G0/G1期百分比升高,S+G2/M期百分比增高,但差异无显著性。低氧组MSC传代细胞的凋亡率低于常氧组,差异也无显著性。在低氧组,MSC传代细胞的PCNA标记指数减低,P53标记指数增高,但是与常氧组的差异无显著性意义。结论:培养条件下1%O2对小鼠骨髓间充质干细胞的增殖具有一定的抑制作用,但作用机制尚不明确。
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