脑血管病严重危害人类健康，已成为当今第三大死亡原因及首位致残原因，并且随着老龄化社会的到来，其发病率呈明显上升趋势，而目前临床尚无理想的治疗手段。因此，以动物脑缺血再灌流模型模拟人类缺血性脑血管病并对之进行研究是当代神经科学的重大课题之一。 Pulsinelli建立的大鼠短暂性前脑缺血模型是目前国际上研究迟发性神经元死亡机制普遍采用的模型之一。脑缺血再灌流后，海马CA1区锥体细胞发生迟发性神经元死亡（Delayed neuronal death,DND，即脑缺血再灌流2-3天后光镜下才见到CA1区锥体细胞的死亡），而CA3区的锥体细胞却几乎不受损害，研究DND发生的机理，并寻找在DND发生前阻断神经元进一步死亡的有效途径，以减轻缺血性脑损伤的程度是脑缺血研究领域急待解决的重要问题之一。 钙超载学说一直在脑缺血后海马CA1锥体神经元死亡发生机理研究中占有统治地位。许多研究也证实在缺血过程中和再灌流早期，细胞内钙浓度明显升高。自从发现凋亡过程参与缺血性神经元损伤后，这一传统观点受到了极大的挑战。 目前对凋亡过程中细胞内Ca^2±稳态的状况尚不清楚。有研究观察到细胞凋亡时(Ca^2±]_i升高，因而激活凋亡级联的某个环节，如激活核酸内切酶引起核小体间DNA段裂。然而，通过激活电压门控性Ca^2±通道、抑制胞内Ca^2±摄取或给予低浓度NMDA使[Ca^2±]_i增加，却能减少培养神经元的凋亡。另有报道，给予NMDA或KCI使细胞内钙浓度上升可阻断剥夺血清导致的培养成神经细胞瘤细胞的调亡，其作用途径是通过钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶激酶（C aM-KK）激活PKB（蛋白激酶B，又叫c消上t或Rac），然后磷酸化BAD，从而起到抗细胞调亡作用。 [Caz±]i升高可以促进神经元存活看似反常，然而在交感神经元中，抑制凋亡的ca2±水平（180一240n玉江）远低于大多数细胞中引起Ca2±超载的毒性水平，如谷氨酸毒性作用的神经元[c a2±]i>5哪。因此，神经元的存活可能依赖于适当的细胞内”钙调定点”。细胞可能有三种不同的ca2±水平:①低ca2±水平，神经元凋亡的危险性高;②中等ca2±水平，神经元易于存活;③具有细胞毒性的高ca2±水平，易于诱导神经元坏死。 支持ca2±调定点假说的证据还有:延长电压门控ca2±通道拮抗剂的作用时间或用低caz±培养液，均可诱导培养皮层神经元的凋亡;如上所述NMDA本身可减少凋亡，而NMDA拮抗剂则可促进培养神经元及发育期啮齿动物脑细胞的凋亡。这些结果同时也表明，NMDA拮抗剂用于脑缺血损伤治疗是一把双刃剑:尽管它有助于减少NMDA受体过度刺激及随后ca2±超载引起的兴奋毒性神经元坏死，但同时也导致细胞内ca2±缺乏而诱导凋亡。ca2±超载与c犷±缺乏相互对立，但均可由同一缺血刺激引起，只是表现在时间上的不同。因此我们推测，在缺血急性期兴奋毒性Ca2±超载占优势，而在晚期迟发性神经元死亡中，ca2±缺乏可能占优势。最近有报道:虽然在缺血期间及缺血后早期，发现CAI锥体神经元钙内流及细胞内钙浓度均增加，然而对单细胞钙染色与形态死亡标记所做的相关分析结果提示，缺血后CAI锥体神经元内钙聚集并不是迟发性神经元死亡的原因，而是其结果。且另有报道，短暂性全脑缺血后晚期，海马cAI神经元并无ca2±超载，甚至静息ca2±水平低于正常。另外我们以往的研究发现，仅在脑缺血后早期的CAI锥体细胞上，由NMDA受体介导的突触传递增强，而在晚期突触传递—4—则呈减低趋势。因此，提示缺血晚期细胞内钙水平减低可能是迟发性神经元死亡的重要机制之一。 L型、二氢毗睫敏感、alc或alD电压敏感钙通道在海马锥体神经元基底树突和胞体都特别集中，通过L型钙通道的电流占细胞总体钙电流的一30一50%。它们的开放和关闭能有效的调节细胞浆内c扩±的水平，而且有证据表明它们还能将钙调信号直接传至细胞核。近年来的研究表明，L型钙通道的激活可以直接调控一些对神经元的功能和存活来说是必需而且重要的基因的表达，如c一Fos，脑源性神经营养因子（brain一derived neurotr叩hie factor，BDNF）和Bel一2等。因此推测L型钙通道功能改变可能参与了脑缺血后海马神经元迟发性死亡。 因此本实验首先观察了脑缺血后海马CAI和CA3锥体神经元L型钙电流的动态变化，并探讨了L型钙电流变化的机制，最后研究了L型钙通道在培养海马神经元死亡中的作用。 首先，我们采用改良的Pulsine伍四血管闭塞法制做大鼠前脑缺血模型，在急性分离海马神经元上采用膜片钳细胞贴附式技术和全细胞技术对CAI与CA3区锥体细胞L型电压依赖性钙通道进行了记录并对其特性进行了比较研究。结果如下:（1） CAI锥体细胞L-型钙通道的膜片总体平均电流在缺血后30分钟 明显增大，而在缺血后24和48小时却明显下降（P<0 .05）:对照 组，0.439功.o58p^（n=25）;缺血后30分钟，1.5一7功.312pA（n=19）; 缺血后6小时，0.419切.099pA（n=23）:缺血后24小时， 0.1 54功.02却A（n=23）;缺血后48小时，0.080士。.02 lpA（n=16）。（2）缺血