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目的:探讨环氧合酶2(Cyclooxygenase 2,COX-2)对于香烟提取物(Cigarette Smoking Extract,CSE)所诱导的内皮细胞凋亡的影响。方法:体外培养人血管内皮细胞株(ECV-304),取指数生长期细胞用于实验。一支去过滤嘴燃烧的香烟由负压吸引驱动装置连续抽吸,吸入烟雾,经三通管的一个出口入无血清1640培养液中制成悬液,过滤除菌,并稀释成含不同浓度CSE的1640培养基,1 h内用于实验。整个实验分为三个部分:1.内皮细胞培养,按照CSE的干预浓度不同,将实验分成四组,即对照组、0.5%CSE干预组、1%CSE干预组、5%CSE干预组。各组细胞培养12h后,采用Hoechst染色法和流式细胞术检测细胞的凋亡情况,免疫细胞化学和Western Blot法检测COX-2的蛋白表达。2.根据上一步实验的结果,选取5%CSE为干预点,分别干预血管内皮细胞0小时、3小时、6小时、9小时、12小时、24小时后,采用流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western Blot法检测COX-2的蛋白表达。3.综合前两步实验的结果,用5%CSE和不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞莱西布(celecoxib),共同干预内皮细胞。根据塞莱西布的干预浓度不同,将实验分为七组,即对照组(0%CSE)、5%CSE干预组、5%CSE+2.5μM/L塞莱西布干预组、5%CSE+5μM/L塞莱西布干预组、5%CSE+10μM/L塞莱西布干预组、5%CSE+20μM/L塞莱西布干预组、5%CSE+50μM/L塞莱西布干预组。各组干预9小时后,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot法检测COX-2的蛋白表达。结果:(1)不同浓度的CSE分别干预内皮细胞12小时后,Hoechst染色检测细胞凋亡结果为,对照组(6.5±0.54%),干预组结果分别为(7.6±0.41%)、(13.5±1.78%)、(32.3±3.22%),0.5%CSE干预组与对照组比较无统计学差异(P＞0.05),余各组间均存在统计学差异(P值均＜0.05);流式细胞术测得细胞凋亡率为,对照组(1.61±0.24%),干预组结果分别为(2.01±0.36%)、(2.31±0.26%)、(5.40±0.39%),各组间比较,均存在统计学差异(P值均＜0.05);Western Blot检测COX-2表达结果显示,随着CSE干预浓度的升高,COX-2的表达逐渐增强,5%CSE干预后COX-2蛋白的表达最高。(2)5%CSE作用于内皮细胞不同时间后,流式细胞术测得各组细胞凋亡率为,对照组(1.73±0.16%)、各干预组分别为(2.69±0.28%)、(2.86±0.15%)、(3.66±0.40%)、(5.39±0.57%)、(8.87±0.41%)。3小时组和6小时组比较,结果无统计学差异(P＞0.05),余各组间比较均存在统计学差异(P值均＜0.05)。Western Blot检测COX-2表达结果显示,随着5%CSE干预时间的延长,COX-2的表达逐渐增强。干预3小时的时侯COX-2蛋白的表达开始增加,9小时达峰,12小时开始逐渐减弱,24小时时明显消失。(3)5%CSE与不同浓度的选择性COX-2抑制剂塞莱西布共同作用于内皮细胞9小时后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率结果显示对照组为(1.78+0.21%),各干预组分别为(3.90±0.27%)、(3.56±0.39%)、(3.13±0.38%)、(2.92±0.21%)、(4.69±0.50%)、(32.60±5.51%)。其中5%CSE+50μM/L塞莱西布干预组与其余各组比较,内皮细胞凋亡率显著增高,结果存在统计学差异(P值均＜0.05),余各组间比较均无统计学差异(P值均＞0.05)。Western Blot检测COX-2表达结果显示,随着塞莱西布干预浓度的升高,COX-2的表达逐渐减弱。结论:(1)CSE可以诱导内皮细胞的凋亡甚至死亡,且存在浓度依赖性和时间依赖性。(2)CSE能够诱导内皮细胞分泌COX-2蛋白,而且存在浓度依赖性和时间依赖性。(3)选择性的COX-2抑制剂塞莱西布,可以抑制内皮细胞COX-2蛋白的表达,并呈现浓度依赖性,低浓度的塞莱西布不足以诱导内皮细胞的凋亡,高浓度则可以促进内皮细胞的凋亡,甚至诱发其死亡。(4)COX-2有助于缓解CSE诱导的内皮细胞的凋亡,在维持内皮细胞的存活方面起着一定的作用。