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目的:研究肾脏缺血再灌注损伤(ischcmia—reperfusion injury,IRY)所引起的急性和慢性肾脏功能下降和组织损伤,以及T淋巴细胞在其中的意义,为肾脏IRI损害的预防和治疗提供新的理论依据。
方法:Balb/c野生型和裸小鼠各42只,分别随机分为A1-A7组和B1-B7组,每组6只。Balb/c野生型小鼠12只,为过继性T淋巴细胞转移组,随机分为C1和C2组,每组6只。氯胺酮100-120mg/kg腹腔注射麻醉。
1.IRI模型的建立:麻醉成功后,取腹部正中切口进入腹腔,分别游离双侧肾蒂,无损伤血管夹阻断双肾蒂45分钟后开放血流。术中保持试验室温度≥27℃,术后加强保暖。
2.野生型小鼠组(A组):A1-A7组分别于假手术后即刻(对照组,后文称为再灌注后0h)、再灌注后24h、48h、72h及4周、6周和8周时取标本,采用腔静脉穿刺取血约1ml,膀胱穿刺取尿约1~1.5ml,再先后取脾脏及肾脏,分别测血肌酐、尿蛋白定量、T淋巴细胞亚群及肾组织病理学。
3.裸小鼠组(B组):处理同A组。
4.过继性T淋巴细胞转移组(C组): Balb/c野生型小鼠(15只)肾脏缺血45分钟后再灌注,普通饲养6周后,再分离提纯其脾脏的T淋巴细胞,过继性种植于C1组小鼠腹腔,每只约1.5×107个。另一组Balb/c野生型小鼠(15只)不进行双肾缺血和再灌注(假手术),6周后分离提纯其脾脏T淋巴细胞,过继性种植于C2组小鼠腹腔,每只约1.5x107个。T淋巴细胞过继性转移后6周取标本,方法同A组。
结果:1.IRI后24h、48h、72h时的野生型小鼠(A2-A4组)和裸小鼠(B2-B4组)均出现了明显的肾功能下降,血肌酐、尿蛋白定量较对照组显著升高(P<0.05),且A2-4组Scr分别高于B2-4组(P<0.05),两组间尿蛋白定量无差异(P>0.05)。
2.A组IRI后4周、6周及8周(即A5—7组)血肌酐、尿蛋白定量持续升高,并呈上升趋势,与A1组差异有显著性(P<0.05),而B5—7组则与对照组(B1组)无显著差异(P>0.05),A5—7组与B5—7组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。
3.C1组Scr和尿蛋白定量显著升高,与A1组和C2组比较差异有统计学意义(P<0.05),C2组肾功能与A1组比较无明显下降,差异无统计学意义(P>0.05)。
4.组织学变化:A组和B组IRI后72h内均出现不同程度的肾小管上皮细胞变性坏死、管型、囊腔扩展,间质炎症、水肿,但A组肾小管坏死评分(Rabb和Solez法积分系统评分)明显高于B组(P<0.05);A5—7组(IRI4周以后)和C1组均有不同程度间质纤维化、中、小动脉周围炎及内膜纤维性增厚、血管腔狭窄,肾小管萎缩,肾小球硬化。B5—7组和C2组组织学检查基本正常,与对照组无明显差异。
5.A2-3组脾CD3+T细胞比例较A1组升高(P<0.05),其余各组间T淋巴细胞亚群均无明显差异(P>0.05)。
结论:本试验通过建立小鼠肾脏IRI模型,并采用过继性T淋巴细胞转移的方法证实:
1.小鼠肾脏IRI不仅能引起肾脏的急性功能下降和组织学损伤,而且是一种潜在的持续性损害因素,能引起慢性进行性的肾功能下降和组织损伤,是肾移植后肾功能进行性下降和组织损伤(如CAN等)发生的独立危险因素之一。
2.T淋巴细胞在小鼠肾IRI引起急慢性肾功能下降和组织损伤中发挥重要作用。
3.本试验提示,若对T淋巴细胞活化及持续性的细胞因子释放等方面采取针对性的预防性措施可预防和(或)减轻移植物IRI损害导致的CAN及其他进行性肾功能下降性肾病。