猪乙型脑炎—猪圆环病毒病二联灭活疫苗研究

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猪乙型脑炎和猪圆环病毒病是危害养猪业的重要传染性疾病,而且乙型脑炎还严重危害人类身体健康。目前还没有特效药治疗这两种疾病,疫苗预防是控制这两种疾病的有效手段。为了有效预防这两种疾病,本研究对本实验室分离鉴定的乙型脑炎病毒LS株在Vero细胞上的培养特性和免疫原性等进行了研究,并利用乙型脑炎病毒LS株和本实验室分离鉴定的猪圆环病毒2型HNYY株研制了猪乙型脑炎-猪圆环病毒病二联油乳剂灭活苗。具体研究结果如下:  1.乙型脑炎病毒LS株的理化特性及其在Vero细胞上的增殖动态研究  对乙型脑炎LS株的理化特性及其在Vero细胞上的增殖规律进行研究。将乙型脑炎病毒LS株以106.2TCID50的接种量接种在100mL细胞瓶铺满单层的Vero细胞,在病毒接种后每隔8h收集细胞上清液和混悬液并测定病毒效价。结果显示,病毒理化特性研究发现乙型脑炎病毒LS株对乙醚、胰蛋白酶、热(56℃)、酸(pH5)敏感,反复冻融,对病毒活力影响轻微;在接种后56h细胞上清液和混悬液的病毒效价达到高峰,分别为106.0TCID50/0.1 mL、106.5TCID50/0.1 mL。  2.乙型脑炎病毒罗山株的免疫原性研究  将乙型脑炎病毒LS株接种Vero细胞增殖,收获的病毒液经甲醛灭活后,以矿物油为佐剂制备出油乳剂灭活苗。将疫苗免疫小鼠和猪,分别免疫2次,间隔2周,免疫后采集血清,检测血清中抗乙型脑炎病毒抗体水平。结果显示:试制疫苗免疫小鼠能够诱导产生平均1∶64的乙型脑炎乳胶凝集试验(LAT)抗体,免疫猪能够诱导猪产生平均1∶200的乙型脑炎血凝抑制(HI)抗体,抗体水平比市售猪乙型脑炎灭活疫苗高。证明了乙型脑炎病毒LS株具有良好的免疫原性。  3.猪乙型脑炎-猪圆环病毒病二联灭活疫苗的研究  利用本实验分离鉴定的乙型脑炎病毒LS株和猪圆环病毒2型HNYY株分别在Vero细胞和PK-15细胞上增殖出较高效价的病毒液,然后通过浓缩,甲醛灭活,等量混合,加入油佐剂乳化,制备出猪乙型脑炎-猪圆环病毒病二联油乳剂灭活疫苗。并对疫苗进行了物理性状检验、无菌检验、安全性检验和小鼠免疫试验。结果显示试制二联苗剂型稳定,对小鼠安全可靠,免疫后能够诱导小鼠产生相应的两种抗体,抗乙型脑炎病毒乳胶凝集抗体平均高达1∶37.33,抗猪圆环病毒2型ELISA抗体平均高达1∶3200,抗体水平与相应单苗相当。证明两种抗原之间没有相互干扰作用,相互间不影响彼此在动物体内的免疫应答。  
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