结直肠癌K-ras基因突变的实验研究及临床意义

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目的:研究结直肠癌(CRC)不同组织标本K-ras基因检测的临床意义。方法:用DNA提取试剂盒提取CRC患者的新鲜原发灶组织120例、石蜡包埋原发灶组织173例、淋巴结转移灶组织48例、远处转移灶组织24例、结直肠腺瘤28例、血浆100例和全血67例的脱氧核糖核酸(DNA),经聚合酶链反应(PCR)扩增,对产物进行K-ras基因所有外显子序列分析(血浆和全血仅检测第一外显子)。同时,对293例CRC原发灶的K-ras状态与其临床病理特征进行对比分析。结果:K-ras检出率:新鲜CRC原发灶100%、石蜡包埋原发灶97.1%、患者全血100%、血浆73.0%。K-ras突变率:新鲜CRC原发灶34.2%、石蜡包埋原发灶33.9%、淋巴结转移灶29.8%、远处转移灶29.2%、患者血浆13.7%、患者全血0%、结直肠腺瘤25.9%。从血浆中检出K-ras突变的10例患者全部为Duke’s分期D期患者。K-ras突变类型的一致率:淋巴结转移灶、远处转移灶、患者血浆、结直肠癌腺瘤与其原发灶比较K-ras突变类型的一致率分别为92.5%(13/14)、85.7%(6/7)、100.0%(10/10)和57.1%(4/7)。在原发灶标本中,第一外显子12、13位点突变占88.8% (87/98),第二外显子61位点突变占3.1% (3/98),第三外显子146位点突变占8.2%(8/98),第一外显子12密码子GGT→GAT是最常见的突变类型。男性患者比女性患者、大于60岁患者比小于60岁患者、隆起型患者比溃疡型患者、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)升高患者比CEA正常患者有更高的K-ras基因突变率,而K-ras基因突变率与病理组织学类型、肿瘤位置、Dukes’分期、淋巴结转移、远处转移无关。结论:结直肠癌石蜡包埋的或新鲜的原发灶组织均可用于K-ras检测要求;仅检测K-ras 12、13位点状态以预测抗EGFR单抗对CRC的敏感性可能不够,应该增加61位点、146位点检测;患者血浆K-ras检测仅在Duke’s分期D期患者中有意义;在无法获得原发灶标本时,患者淋巴结转移灶、远处转移灶的K-ras检测结果也有一定参考意义;患者全血、结直肠腺瘤不宜用于临床K-ras检测。CRC的K-ras突变率与患者性别、年龄、大体标本类型、CEA水平有关。
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