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论文内容由文献综述、动物实验两部分组成。一、文献综述综述一主要阐述了参与COPD发病的四大机制,并列举了近5年内从各个机制入手展开的中药临床与实验研究进展;综述二主要阐述了 ERK信号通路在COPD发病中的作用,并着重阐述了 ERK信号通路在气道平滑肌分泌、增殖,从而为本实验研究提供理论依据。综述三主要阐述了"微型癥瘕痹阻肺络"这一病机学说,并详细介绍了该病机的理论基础如络病理论、癥瘕理论的历史渊源。二、动物实验研究研究目的:通过建立COPD大鼠模型,检测益气消癥方对不同组别大鼠气道平滑肌数量、形态、结构的变化,血清中气道平滑肌增殖相关生长因子TGF-β1、FGF、PDGF,以及肺组织中PCNA、ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达,探讨益气消癥方对COPD模型大鼠肺组织中气道平滑数量、形态、结构及相关血清学因子的影响以及对ERK1/2信号通路的作用,研究益气消癥方对气道平滑肌的作用及机制。从分子生物学层面探讨益气消癥方对COPD的干预作用,证明肺络微型癥瘕理论的正确性,为中医治疗COPD提供理论指导及参考。研究方法:健康雄性Wistar大鼠60只,随机分成空白组、COPD模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,共6组,每组10只。采用香烟烟熏联合气道注入LPS法建立慢性阻塞性肺疾病大鼠模型。采用自制熏烟箱,2只大鼠1笼,置入熏烟箱后予60分钟香烟烟熏,每日1次,连续熏烟12周;实验第7、21天气道内滴入LPS,滴入当天不进行熏烟。实验开始后,中药组每日灌胃益气消癥方颗粒溶液1次,西药组每日予雾化布地奈德1次,模型组每日灌胃生理盐水1次,空白组不做处理。12周末处死各组大鼠,留取血清及组织学标本。病理标本行HE染色,用Image Pro-plus图像分析仪检测气道增殖情况,用ELISA法检测血清中TGF-β1、FGF、PDGF的表达,用Western-blot法检测肺组织中PCNA、ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达水平。数据采用SPSS 21.0统计软件进行分析,探讨益气消癥方对COPD的干预作用。研究结果:1.益气消癥方对COPD大鼠一般情况的影响空白组大鼠活泼好动、反应灵敏,进食水正常,皮毛光泽,大便粪质柔软,口腔内无分泌物,无咳嗽,舌象红润,爪甲光泽。模型组大鼠:精神较差、易激惹,活动量不如空白组,进食水正常,皮毛黄涩无光泽,大便部分不成形,口腔内有分泌物阻塞,咳嗽频频,爪甲无泽,体型较空白组瘦弱。各干预组大鼠:精神较差、活动量不如空白组,进食水正常,皮毛黄涩无光泽,大便部分不成形,口腔内分泌物较模型组减少,咳嗽频率较模型组降低,体型与模型组差异不明显。2.益气消癥方对COPD大鼠气道平滑肌增殖的影响2.1大鼠HE病理切片情况空白组大鼠:气道上皮纤毛排列整齐,气道壁结构完整;气管内可见少量炎性细胞浸润且以淋巴细胞为主;气道平滑肌层菲薄,有少量杯状细胞,管壁未见增厚;肺泡壁结构完整,大小均匀,肺泡间隔厚度正常。模型组大鼠:气道上皮纤毛排列紊乱,气道粘膜充血、水肿,可见大量炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主;平滑肌层增厚紊乱,可见大量杯状细胞,管壁亦较空白组增厚;肺泡壁结构破坏,部分融合成肺大泡,大小不均与,肺泡数量变少,间隔变窄。药物干预组大鼠:西药组、中药中高剂量组干预使支气管粘膜充血水肿、炎性细胞浸润情况较模型组减轻;肺泡壁破坏数目较模型组减少。低剂量干预组与模型组相比变化不明显。2.2大鼠气道平滑肌的测定用Western-Blot法检测各组大鼠肺组织中PCNA蛋白的表达,模型组大鼠肺组织内PCNA表达显著升高;西药和中药组大鼠PCNA蛋白表达较模型组降低;用Image pro-plus测定各组大鼠气道平滑肌增殖情况,模型组大鼠WAt/Pbm、WAm/Pbm、N/Pbm比值明显高于空白对照组,西药组、中药中高剂量组可降低WAt/Pbm、WAm/Pbm、N/Pbm的比值。表明益气消癥方在改善气道平滑肌增殖方面有着显著的效果,中药低剂量组可能因为剂量不足,效果欠佳。2.3大鼠血清生长因子的检测ELISA法检测各组大鼠血清,结果显示COPD模型组TGF-β1、FGF、PDGF表达较空白组升高,各治疗组中,TGF-β1、FGF、PDGF表达含量均较模型组降低,表明西药及益气消癥方可以有效抑制上述三种生长因子的表达,中药低剂量组效果则较差。3.益气消癥方对大鼠肺组织ERK1/2信号通路的影响Western-Blot结果显示,与COPD空白组比较,模型组大鼠肺组织内ERK1/2蛋白水平和磷酸化的蛋白分子表达明显增高,而空白组大鼠肺组织内ERK1/2和磷酸化处于较低水平;提示在C0PD模型组大鼠肺组织内ERK1/2信号通路被明显活化;阳性对照药物布地奈德可以明显抑制C0PD大鼠肺内ERK1/2信号通路的活化,益气消癥方各组也均能抑制C0PD大鼠肺内ERK1/2信号通路的活化,其中以中、高剂量组效果明显,低剂量组作用较弱,中药整体效果不如西药组。研究结论:1.益气消癥方可以改善C0PD气道平滑肌增殖情况,对气道重构有一定抑制作用。2.益气消癥方可能通过抑制ERK1/2信号通路上游启动因子TGF-β1、FGF、PDGF的表达进而抑制ERK1/2信号通路的活化,发挥对气道平滑肌增殖的调控作用。3.益气消癥方对实验大鼠气道平滑肌增殖及ERK1/2信号转导通路的影响存在量效关系,中、高剂量组治疗效果优于低剂量组。4.益气消癥方的组方来源于"微型癥瘕痹阻肺络"的病机假说,该方的实验有效性反证了病机理论的正确性。