论文部分内容阅读
锌指抗病毒蛋白(Zinc-fingerantiviralprotein，ZAP)是一个受Ⅰ型干扰素诱导上调的含有四个CCCH锌指结构的宿主限制性因子。ZAP可以特异性地抑制Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)，埃博拉病毒(Ebolavirus)，辛得比斯病毒(Sindbisvirus)以及马堡病毒（Marburgvirus）等病毒的复制。ZAP可以直接结合病毒RNA，并招募细胞内的RNA降解机器通过3-5和5-3途径降解病毒RNA。但是，对于ZAP的抗病毒功能是如何受到调节的我们并不清楚。本文首次发现了糖原合酶激酶3β(GSK3β)通过磷酸化调节ZAP蛋白的抗病毒活性。
本文通过磷酸酶敏感性实验发现了大鼠ZAP(rZAP)蛋白存在磷酸化修饰。通过序列分析和比对，确定了rZAP的N端从第255位到第295位氨基酸区域为磷酸化区域。随后的实验结果表明GSK3β可以在体外和体内磷酸化rZAP，并且磷酸化位点就在磷酸化区域内。为了更精细地研究GSK3β的磷酸化位点，我们利用GSK3β的小分子抑制剂SB216763和磷酸化抗体分析rNZAP突变体。研究发现，rZAP的第274位丝氨酸作为primingsite介导了GSK3β对第257位，第262位，第266位和第270位丝氨酸的磷酸化位点。
我们发现，敲低内源GSK3β的表达，rZAP抗MLV-Luc的活性会降低。而用SB216763抑制GSK3β激酶活性后，rZAP抗MLV-Luc和NL4-3-Luc病毒的能力均会下降。这些结果说明，GSK3β对rZAP的磷酸化修饰起到正向调节rZAP抗病毒活性的作用。
通过序列比对，我们发现人ZAP(hZAP)蛋白N端也存在磷酸化修饰。敲低内源GSK3β的表达或者用SB216763抑制GSK3β的活性均会减弱hZAP的抗病毒活性。
综上所述，我们发现GSK3β可以通过磷酸化修饰调节ZAP蛋白的抗病毒活性。由于ZAP蛋白在抗病毒中的重要作用，了解ZAP抗病毒活性如何受到调控的将有助于更好地理解宿主和病毒之间的相互作用。