纳米粒子(Fe3O4-Cy5.5-NGR)在裸鼠卵巢癌模型的双模态靶向效能研究

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目的验证纳米粒子(Fe3O4-Cy5.5-NGR)在人卵巢透明细胞癌ES-2细胞裸鼠皮下移植瘤模型中的靶向效能。方法1.分组:选取6周龄BABL/c雌性裸鼠12只(体重约20g)随机分为实验组和对照组,并进行标记;2.化学方法合成以Fe为核心,表面连接有Cy5.5荧光染料的双模态对比剂,实验组分子探针表面通过PEG3500连接NGR短肽,对照组分子探针仅连接PEG3500;观察、验证Fe3O4-Cy5.5-NGR、Fe3O4-Cy5.5纳米粒的物理性质、细胞水平靶向性、细胞毒性、铁含量等特征。3.在Mc Coy’s 5A培养基下对ES-2细胞进行传代培养至细胞数约6×107个。4.建模:两组裸鼠皮下注射细胞数为5×106个的ES-2细胞,肿瘤生长至约8mm裸鼠备用。5.成像:经尾静脉注射Fe3O4-Cy5.5-NGR和Fe3O4-Cy5.5分别至实验组和对照组裸鼠体内,在7.0T磁共振和小动物远红外荧光仪下检测纳米粒子的磁共振及荧光靶向效能、体内分布和代谢等情况,两组分析对比。6.取移植瘤组织进行荧光和病理染色。结果细胞水平:1.TEM观察Fe3O4-Cy5.5-NGR比Fe3O4-Cy5.5纳米粒直径略大,表面显锐利;2.不同浓度Fe3O4-Cy5.5-NGR(0.124-0.987mmol)和Fe3O4-Cy5.5(0.215-1.712mmol)纳米粒与细胞共培养后细胞活性均保持在90%左右,提示实验范围内的纳米粒使用剂量无细胞毒性。3.设置两组纳米粒的浓度为40、80和160μmol,流式细胞仪结果显示实验组荧光强度增强,分别是对照组的3.1、1.65和1.26倍。4.MR测定Fe3O4-Cy5.5-NGR、Fe3O4-Cy5.5的弛豫率分别为155.49 m M-1S-1,180.74 m M-1S-1。组织水平:1.MR/NIRF显示实验组比对照组肿瘤局部T2和T2*信号明显减低/荧光信号增强,24h为信号改变量最多的时间点,并且NIRF提示2h-24h纳米粒子开始经血液循环代谢出体外。2.CSLM图像显示肿瘤组织荧光染色实验组移植瘤有更高的荧光信号强度,以细胞核周围的胞浆和胞膜浓聚为多。3.移植瘤组织病理H&E染色见异型性明显的透明细胞癌。结论双模态靶向对比剂Fe3O4-Cy5.5-NGR有很好的靶向效能,在移植瘤模型上能提高卵巢癌的显像效果。
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