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目的:Skp2是泛素连接酶SCFskp2的底物识别亚基,能够特异性地识别细胞周期负性调节因子p27kip1, Skp2在许多肿瘤中有不同程度地升高,且和肿瘤的发展、预后密切相关,而针对Skp2的靶向研究显示Skp2的下调对肿瘤有一定的抑制作用。目前Skp2与胰腺癌关系研究较少,尤其是Skp2下调对胰腺癌细胞是否有抑制作用尚未见报道。本研究旨在探讨Skp2及相关蛋白在胰腺癌组织中的表达及相互间的关系;并应用RNA干扰技术,观察Skp2对胰腺癌细胞的影响,为Skp2成为胰腺癌治疗的新靶点提供实验依据。方法:(1)Skp2、p27kip1及PTEN在胰腺癌组织中的表达:采用免疫组织化学P-V法检测32例胰腺癌及13例癌旁组织中Skp2、p27kip1及PTEN的表达情况;(2)Skp2 siRNA对胰腺癌细胞干扰的初步研究:①RT-PCR检测Skp2在胰腺癌细胞系SW1990、Panc-1中的表达;②阳离子脂质体转染技术将siRNA导入胰腺癌细胞,荧光显微镜下观察胰腺癌细胞转染效率,通过脂质体与RNA量的比例及转染时间两方面因素优化胰腺癌转染条件;③分以下5组:A.空白细胞组:未经任何处理的培养细胞;B.脂质体组:培养细胞+脂质体;C.阴性对照组:培养细胞+脂质体+阴性siRNA序列;D.阳性对照组:培养细胞+脂质体+阳性siRNA序列;E.实验组:培养细胞+脂质体+Skp2siRNA序列;④用RT-PCR方法检测各组细胞Skp2mRNA的表达;⑤用PI单染DNA法检测各组细胞周期的变化;⑥MTT法检测各组细胞增殖情况。结果:(1)Skp2、p27kip1及PTEN在胰腺癌组织中的表达及相互间的关系:①Skp2在胰腺癌组织中的阳性表达率为56.2%(18/32),显著高于对照组中的23.1%(3/13)(P<0.05),并随着分化程度的降低而增高(r=-0.483,P=0.005);但Skp2在胰腺癌中的表达与性别、年龄、肿瘤部位及有无淋巴结转移无关。②p27Kip1在胰腺癌组织中的阳性表达率为25.0%(8/32),显著低于对照组中的76.9%(10/13)(P<0.05),并随着分化程度的降低而降低(r=0.444,P=0.011);③PTEN在胰腺癌组织中的阳性表达率为31.8(%10/32),显著低于对照组的69.2%(9/13)(P<0.05),并随着分化程度的降低而降低(r=0.446,P=0.010);④胰腺癌组织中,Skp2的表达与p27kip1表达呈负相关(r=-0.437,P=0.012);而Skp2的表达与PTEN无明显相关性(r=-0.159,P=0.384);p27kip1的表达与PTEN亦无明显相关性(r=0.276,P=0.126)。(2)Skp2siRNA干扰胰腺癌细胞的研究:①胰腺癌细胞系SW1990、Panc-1中均有Skp2的表达,但两者的表达无显著差异性(P>0.05);②当脂质体与RNA的比例为1比2及转染时间为9小时时胰腺癌细胞可获得最高的转染效率,但与阳性对照Hela细胞相比,胰腺癌转染效率相对较低;③Skp2siRNA转染胰腺癌细胞后,实验组Skp2mRNA表达量与阴性对照组相比无显著性差异(P>0.05);④Skp2siRNA转染胰腺癌细胞后,实验组细胞S期含量较阴性对照组无明显下降(P>0.05);⑤Skp2siRNA转染胰腺癌细胞后,实验组细胞增殖较阴性对照组无明显改变(P>0.05)。结论(1).胰腺癌组织中Skp2蛋白呈高表达,并随着分化程度的降低而增高,提示它可促进胰腺癌的发生与发展。(2). p27kip1和PTEN蛋白在胰腺癌组织中低表达,并随着分化程度的降低而降低,表明它们表达缺陷可能参与了胰腺癌的发生与发展。(3).在胰腺癌组织中Skp2与p27kip1蛋白两者的表达呈负相关;但PTEN与Skp2和p27kip1的表达无明显相关性,说明尽管PTEN可以通过Skp2影响p27kip1,但PTEN在胰腺癌发生发展中的作用可能与Skp2及p27kip1无关。(4).胰腺癌细胞系SW1990、Panc-1均有Skp2表达,因此它可能成为治疗胰腺癌的潜在靶点。(5).在本研究中胰腺癌细胞转染效率低及脂质体瞬时转染的自身缺陷可能是本次RNA干扰实验未获成功的主要原因。