论文部分内容阅读
目的:本研究旨在通过对实验性慢性支气管炎肺气虚证大鼠血液及肺组织中内皮素(ET-1)、一氧化氮(NO)、血栓素(TXB2)、6-酮-前列腺素(6-Keto-PGF1α)等指标的检测分析,并运用免疫组化染色观察其支气管及肺组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达特征,从微观角度探讨慢支肺气虚证血瘀状态,进一步揭示其证候本质,并以补气祛瘀中药与传统补益肺气方药进行治疗干预,探讨其作用机制,从而为临床治疗提供实验依据。方法:实验前1周将50只清洁级SD大鼠置于实验环境中喂养,室温20℃~25℃。将动物随机分为正常对照组(简称“正常组”)10只,造模组40只,雌雄各半。造模组采用改良烟熏法复制慢支肺气虚证动物模型。将造模大鼠置于特制的1m×1m×1m烟室中,用刨花、锯末、烟叶各50g,点燃熏烟,每日2次,每次30分钟,持续30天。正常组则置于正常无烟环境中饲养。分别在1、8、15、22、30天监测体重,每日观察记录其一般状态。模型复制成功后,将造模组大鼠随机分为模型对照组(简称“模型组”)、补气祛瘀高剂量组(简称“高剂量组”)、补气祛瘀低剂量组(简称“低剂量组”)、补气组(阳性对照药组,简称“补气组”)4组,每组10只,雌雄各半。 <WP=4>5组均于造模结束后第2天起连续灌胃生理盐水或药物21天。正常组:灌胃生理盐水10ml/kg,每日1次;模型组:灌胃生理盐水10ml/kg,每日1次;高剂量组:每日用药剂量为15.6g/kg(相当于临床成人用药量的14倍),每日1次灌胃;低剂量组:每日用药剂量为7.8g/kg(相当于临床成人用药量的7倍),每日1次灌胃。补气组:每日用药剂量为7g/kg(相当于临床成人用药量的7倍),每日1次灌胃。于灌胃结束后第2天,断头取血,立即以4℃3500r/min离心5min,分离血浆,并取血清,-20℃冻存待检。取左肺组织制成10%的肺组织匀浆(将肺组织用冰生理盐水冲洗,滤纸吸湿后,称取湿重0.3g左右,加入预冷的生理盐水,用电动匀浆器研磨),4℃6000r/min离心5min,提取上清液,用双缩脲法测定蛋白含量,-20℃冻存待检。取右侧肺脏中部组织0.5cm×0.5cm,用10%甲醛(pH7.4磷酸盐缓冲液配制)固定,常规石蜡包埋,切片,用于免疫组化染色。采用放免法测定大鼠血浆和肺组织中ET-1、TXB2、6-Keto-PGF1α含量,采用硝酸还原酶法测定血清和肺组织中NO含量。采用SP免疫组织化学染色方法,观察支气管及肺组织中VEGF的表达情况。结果1一般状态观察造模组大鼠于烟熏后第12天开始,出现咳嗽、痰鸣、皮毛失去光泽,倦怠,活动减少,并呈现出毛枯体瘦,口鼻中有质地清稀的分泌物流出,肛门未见粘液或稀便附<WP=5>着,粪便质地无明显变化。正常组则未见明显异常。与正常组相比,造模组体重增长较为缓慢。以造模30天时体重的增幅比较,造模组增加(26.92±7.35)g,正常组增加(46.21±5.09)g,两组体重变化有明显差异(P<0.01)。负重游泳实验结果表明,正常组游泳时间为(4.02±0.35)min,造模组为(2.02±0.55)min,两组相比有显著性差异(P<0.01)。2各组大鼠血液及肺组织中ET-1、NO、TXB2、6-Keto-PGF1α的变化2.1各组大鼠血液及肺组织中ET-1和NO的含量2.1.1各组大鼠血浆及肺组织中ET-1的含量结果显示,模型组大鼠血浆、肺组织中ET-1含量(223.49±20.48,14.92±3.14)均较正常组(131.19±12.21,7.34±1.82)明显升高(P<0.01);经用药干预,高剂量组(163.23±30.90,9.59±2.27)、低剂量组(168.91±24.95,10.52±2.17)、补气组(200.54±22.76,12.74±1.71)与模型组相比均有明显的降低(P<0.05或P<0.01);高剂量组、低剂量组血浆和肺组织中ET-1的含量明显低于补气组(P<0.01),但高、低剂量组相比无显著性差异(P>.05)。2.1.2各组大鼠血清及肺组织中NO的含量结果显示,模型组大鼠血清及肺组织中NO含量(21.88±3.68,0.13±0.02)较正常组(39.89±4.99,0.23±0.02)明显降低(P<0.01);经用药干预,高剂量组(34.38±5.71,0.19±0.03)、低剂量组(32.67±4.79,0.19±0.04)、补气组(27.22±6.30,0.16±0.03)与模型<WP=6>组相比明显升高(P<0.05或P<0.01);高剂量组、低剂量组血清和肺组织中NO的含量明显高于补气组(P<0.05或 P<0.01),但高、低剂量组相比无显著性差异(P>.05)。2.2各组大鼠血浆及肺组织中TXB2、6-Keto-PGF1α的含量及其比值的变化结果显示,模型组大鼠血浆、肺组织中TXB2、6-Keto-PGF1α的含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值(783.69±39.49、72.08±8.61;772.35±65.00、69.71±4.77;1.02±0.10、1.04±0.15)较正常组(474.36±36.14、31.27±8.12;616.83±22.35、48.54±3.30;0.77±0.08、0.63±0.14)明显升高(P<0.01);经用药干预,高剂量组(575.78±49.64、42.97±9.04;678.06±45.87、56.76±8.78;0.85±0.09、0.77±0.16)、低剂量组(582.78±45.67、44.07±8.77;680.64±46.55、56.68±5.74;0.86±0.05、0.77±0.11)、补气组(683.13±55.36、57.76±8.86;728.16±38.70、63.49±6.71;0.94±0.08、0.91±0.09)与模型组相比均有明显降低(P<0.05或P<0.01);高、低剂量组