人结肠癌组织中B7-H4的表达及其临床意义

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目的:观察人结肠癌组织中B7-H4分子的表达水平,并初步探讨B7-H4的表达与调节性T细胞及白细胞介素10之间的联系。方法:收集华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科结肠癌手术标本60例(经病理证实)。通过免疫组织化学和流式细胞分析方法,检测癌组织与癌旁正常组织中B7-H4的表达水平;通过流式细胞分析方法检测癌组织与癌旁正常组织中调节性T细胞(CD4~+ CD25~+ regulatory T cells, Tregs)的含量;利用免疫磁珠分选试剂盒分选组织与健康人外周血来源的调节性T细胞与效应性T细胞(CD4~+ CD25- conventional T cells, Tcons),蛋白印迹(Western blotting)与流式细胞分析法检测两者中白细胞介素-10的含量;利用免疫磁珠分选试剂盒分选癌组织中的调节性T细胞,并与健康人外周血单核细胞(PBMC)共培养48h,观察调节性T细胞对单核细胞上B7-H4的诱导表达影响。结果:1.免疫组织化学显示B7-H4在癌组织中表达明显,而癌旁正常组织几乎无B7-H4表达;流式细胞分析显示,癌组织B7中-H4的阳性表达率为62±8%,对应的平均荧光强度(MFI)为2480±320;而癌旁正常组织中为10±2%,MFI为400±80;两者表达水平差异有统计学意义(P<0.05);而且B7-H4是在肿瘤相关浸润巨噬细胞(TAM)上表达。2.流式细胞分析显示,Foxp3(调节性T细胞表面标志)在癌组织和癌旁正常组织CD3~+ CD4~+ T细胞中阳性表达比例分别占22±5%和5±3%(P<0.05); 3.蛋白印迹显示,调节性T细胞的IL-10含量明显高于同源效应性T细胞;同时,酶联免疫吸附法(ELISA)显示培养调节性T细胞与效应T细胞的清液中IL-10的浓度分别为200±25pg/ml和50±8pg/ml,两者差异有统计学义; 4. B7-H4体外诱导显示,将单核细胞与调节性T细胞共培养48h后,其B7-H4阳性表达率达40±5%,MFI为2000±100;而加入IL-10拮抗剂组分别为7±3%和400±80;单核细胞单独培养组分别为5±2%和300±50;两组间比较差异有统计学意义。结论:结肠癌中存在B7-H4的高表达,且是肿瘤相关巨噬细胞胞膜表面表达B7-H4;肿瘤微环境中的调节性T细胞可能是分泌IL-10的重要来源;它能够诱导单核细胞表达B7-H4,而IL-10可能在诱导过程中起重要作用。
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