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琥珀酸(Succinic acid)作为三羧酸循环的中间产物之一,在机体代谢中具有重要地位。琥珀酸能提高动物抗应激能力和抗病力,对脂肪酶活性和胰岛素敏感性均有显著促进作用;另外,琥珀酸也可以通过糖异生转变成葡萄糖,为机体提供能量。然而,琥珀酸对鱼类糖稳态和能量代谢的影响还鲜有报道。 本研究首先建立斑马鱼琥珀酸养殖模型,向1月龄斑马鱼投喂5种琥珀酸(以琥珀酸钠形式,sodium succinate,以下简写为SS)处理组,包括SS0%(即对照组,CK)、SS0.05%、SS0.1%、SS0.15%及SS0.2%。饱食投喂2周结果表明琥珀酸不影响存活率与摄食率,但显著促进增重,尤其以0.15%SS组时增重最显著(P=0.006),与CK相比提高21.1%。尽管饲料转化效率无显著差异,但0.15%SS组饲料能量转化效率显著提高(P=0.007),且能量增长率提高1.08倍(P=0.007),此外,0.15%SS组标准代谢能显著降低40.3%(P=0.007),说明琥珀酸钠的促生长作用与宿主能量消耗降低有关。与CK相比,0.15%SS组粗蛋白和粗脂肪分别提高2.8%(P=0.029)和24.34%(P=0.008),且肠道菌群结构被显著改变。TAG分析表明,0.15%SS组肠道、肝脏、肌肉分别升高69.8%(P=0.014)、89.2%(P=0.033)、2.8倍(P=0.036),且肌纤维面积升高15.5%(P=0.035)。 对斑马鱼糖耐受性和SDH活性及基因表达分析,0.15%SS组斑马鱼糖耐受性显著提高。腹腔注射葡萄糖后,血糖在1h时开始下降,6h恢复到正常水平。但与CK相比,0.15%SS组血糖下降速度显著快于CK,2h、4h下降速度分别增加19.1%(P=0.021)、24.7%(P=0.032),5h时下降速度增加43.7%(P<0.001)。另外,肠道SDH活性及基因表达分别提高26.4%(P=0.043)和70.3%(P=0.009);肝脏分别提高77.3%(P=0.047)和97.0%(P=0.019);肌肉SDH活性提高70.3%(P=0.009)。说明琥珀酸钠可维持斑马鱼糖稳态,以及可作为三羧酸循环底物直接进入机体参与代谢。 为进一步说明琥珀酸钠是如何影响斑马鱼营养代谢的,对其肠道、肝脏和肌肉中三大营养物质代谢进行分析。结果发现与CK相比:1、肠道糖异生关键酶G6Pase、PEPCK活性分别降低35.9%(P=0.027)和39.7%(P=0.055),其基因分别下调51.4%(P=0.004)和54.8%(P=0.009);参与脂合成的ACC和FAS基因分别上调77.9%(P=0.066)和76.7%(P=0.001),参与甘油三酯分解的ATGL基因下调58.2%(P=0.012);参与蛋白降解的GDH1a和APN基因分别下调45.9%(P=0.007)和38.1%(P=0.017)。2、肝脏G6Pase、PEPCK活性分别升高87.1%(P=0.009)和79.2%(P=0.004),其基因分别上调1.4倍(P=0.005)和45.0%(P=0.036),且糖原合酶(Gys)基因上调1.2倍(P=0.038);ACC、FAS和DGAT2基因分别上调64.3%(P=0.039)、83.6%(P=0.032)和1.7倍(P=0.024),HAD基因下调53.5%(P=0.04);GDH1a和APN基因分别下调31.8%(P=0.018)和51.3%(P=0.011)。3、肌肉糖酵解关键酶PFK基因上调86.7%(P=0.016),Gys基因上调1.9倍(P=0.045);ACC和FAS基因分别上调89.7%(P=0.021)和2.2倍(P=0.034),CPT1A和ACOX3基因分别下调59.1%(P=0.005)和80.1%(P=0.001);GDH1a和APN基因分别下调33.1%(P=0.004)和58.6%(P=0.033)。 以上结果说明,饲料中添加0.15%琥珀酸钠可以改善斑马鱼糖稳态,加强三羧酸循环;抑制肠道糖异生、脂肪分解和蛋白质分解过程,节约肠道中的蛋白质和脂肪,使更多的蛋白质和脂肪到肝脏和肌肉利用,促进肝脏和肌肉蛋白质和脂肪合成,从而促进斑马鱼生长(能量沉积);为琥珀酸在鱼类糖稳态和营养代谢中的作用提供参考。