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目的:探讨丹参多酚对铁过载引起的脐血造血细胞氧化应激损伤的保护作用。 方法: 1．脐带血单个核细胞（UC-MNCs）的分离及培养脐带血：羟乙基淀粉=4:1的比例要求混合均匀，在室温20-25℃条件下自然沉淀1.5小时。吸白膜层，按1:5的比例加NH4Cl红细胞裂解液混匀，避光静置10min，离心弃上清，1640培养液洗涤2遍后，采用完全培养基（含10％胎牛血清的1640的培养液）悬浮单个核细胞。显微镜下计数细胞，调整至1×106/mL的细胞密度，并接种于12孔培养板中，放置于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养24小时。 2．铁过载细胞模型建立及细胞分组枸橼酸铁胺（FAC）组及丹参多酚低、中、高剂量组以FAC400μmol/L浓度建立铁过载细胞模型，于培养第2天加入含上述浓度的FAC的培养液，此后每24小时使用1640培养液更换液体，制备铁过载细胞模型，共在400μmol/L FAC中培养48小时。在培养第3天，丹参多酚低剂量组加入18μg/mL丹参多酚、中剂量组加入50μg/mL丹参多酚、高剂量组加入160μg/mL丹参多酚，继续培养24小时。对照组则不需要加任何试剂，常规培养96小时。 3．铁过载细胞模型鉴定钙荧光素乙酰氧基甲酯（calcein-AM）是可对所有存活状态的细胞进行检测的试剂，其本身具有荧光标记特性，可以很容易的进入存活细胞的细胞膜，到达细胞质后，calcein做为酯酶水解产物留在细胞内，发强绿色荧光。Calcein不能透过细胞膜而滞留在胞质与铁可逆性结合，从而使荧光淬灭。细胞培养96小时后，收集FAC组、对照组细胞，用1640培养液将细胞洗涤2次，显微镜下计数细胞，调整至1×106/mL的细胞密度，加入calcein-AM，终浓度为0.125μmol/L，于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中孵育15 min，PBS洗涤细胞2次后，在激发光波长为496nm，吸收光波长为516nm下采用流式仪，对每一组细胞检测其平均荧光强度水平，经测FAC组、对照组LIP荧光强度分别为（45.20±8.30）、（78.21±9.47），FAC组可变铁池（LIP）荧光强度低于对照组，证实FAC组关于铁过载的细胞模型成功建立。 4.细胞内氧化应激（ROS）水平根据试剂盒的相关说明完成操作，使用2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）标记脐带血单个核细胞，DCFH-DA为非荧光脂类可渗透性成分，进入细胞，随之被酯酶水解，生成产物DCFH，后者由于ROS的存在，被氧化成非渗透性荧光成分DCF，DCF具有的荧光强度较胞内产生的ROS成正相关。细胞培养96小时后，调整细胞密度为1×106/mL，加入10 mmol/L的2，7-二氯荧光黄双乙酸盐，使其最终浓度达到1μmol/L，并加入10μlCD33-PE（或20μlGlyA-PE），分别标记于粒细胞以及红细胞。于37℃避光温育20 min，用PBS洗涤3次，重悬于PBS中，于激发光波长488nm，吸收光波长为525nm条件下，采用流式仪分别检测各实验组ROS水平。实验重复3次。 5.细胞凋亡率细胞培养96小时后，依照试剂盒具体说明，按步骤完成操作，使脐血单个核得细胞密度调整为1×106/mL。取100μL细胞悬浮液于流式管中，加5μL AnnexinⅤ-FITC和10μL碘化丙啶，混合均匀后，予以日常室温放置，并避光进行孵育15 min，随后采用流式仪对各个实验组样本进行凋亡率检测。实验重复3次。 6.细胞集落计数细胞培养96小时后，收集各个实验组的UC-MNCs，1640培养液洗涤细胞2次，后重新悬浮细胞，并予以计数。在24孔培养板中进行集落培养，每孔中设定甲基纤维素半固体培养基0.5 mL，加入各组 MNCs1×105个。在37℃、5%CO2培养箱中培养7～14天后，分别在显微镜下对红系祖细胞集落形成单位（CFU-E）、粒-单核系祖细胞集落形成单位（CFU-GM）、爆式红系祖细胞集落形成单位（BFU-E）和混合祖细胞集落形成单位（CFU-mix）进行计数。实验重复3次。 结果: ① FAC组（703.16±54.47）ROS水平较对照组（163.74±7.43）升高（p<0.05），丹参多酚的低剂量、中剂量、高剂量组（414.40±21.93；415.31±14.11；185.91±7.24）较FAC组ROS水平降低（p<0.05）。 ② FAC组细胞的凋亡增高，与对照组相比具有统计学差异，（p<0.05）。丹参多酚高剂量组与FAC组相比凋亡减少，差异有统计学意义（p<0.05）。 ③ FAC与对照组相比，FAC组细胞集落计数明显低于对照组（p<0.05）；丹参多酚各组集落细胞计数较FAC组均增加，其中高剂量组差异具有统计学意义（p<0.05）。 结论:铁过载可使细胞内的ROS显著升高、诱导更多细胞凋亡，进而起到抑制脐血来源的造血细胞增殖、分化的功能。丹参多酚可一定程度上逆转此作用，并且随使用剂量的增加，作用表现更明显。