蛛网膜下腔出血大鼠模型早期脑损伤中S1PR1的表达及依达拉奉干预后的影响研究

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目的:本实验采用SD(Sprague dawley)蛛网膜下腔出血大鼠模型,并从形态学水平、分子水平和药物干预等方面进行实验,采用HE染色、WB、reat-time PCR等方法,观察蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠脑组织中S1PR1(Sphingosine-1-Phosphate Receptor 1,S1PR1)和炎症因子TNF-α的表达情况。初步研究并讨论依达拉奉对S1PR1的表达变化的作用和对蛛网膜下腔出血早期脑损伤的影响。方法:实验选用的是70只等级属于清洁级、体格较为健康、性情相对危险的雄性Sprague-Dawley大鼠,年龄范围控制在周龄10~12之间,体重控制在250g以上,300g以下的范围内。然后基于随机分组的方法理论,把上述大鼠分为数量为10只不作处理的空白参照组,数量为20只假定做了手术的假手术组,蛛网膜下腔出血早期脑损伤组(n=20)和药物干预组(n=20)四个组,这四组为了方便实验操作,分别编号为第1至4组。采用视交叉前池注血法建立蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期脑损伤(Early Brain Injury,EBI)动物模型,造模后对药物干预组大鼠采用依达拉奉进行药物干预。造模成功24h后,采用动物行为学评分法来评价SD大鼠的神经功能缺损情况,并对各组大鼠的神经功能缺损评分进行比较。采用HE染色观察大鼠脑组织的病理形态,观察各组大鼠神经元坏死情况,评估各组大鼠的脑组织损伤程度。采用Western Blot的方法检测各组大鼠脑组织中S1PR1蛋白和TNF-α的表达情况,并对各大鼠脑组织中S1PR1蛋白和TNF-α的表达情况进行比较。采用real-time PCR的方法检测各组大鼠脑组织中S1PR1mRNA的定量表达情况,并根据各组大鼠脑组织中S1PR1mRNA的定量表达情况的显示结果,对数据经过处理,再分析对比。结果:1.根据显示的结果,在神经功能的完善性能方面,对各组实验进行评价:其中第一组和第二组在神经性能是否完善方面的结果一样,都为0分,蛛网膜下腔出血早期脑损伤组和在药物作用下进行试验的组即第三组和第四组,其得到的结果中,最低评分0分以及最高的评分4分都不成规律的出现,需要用同等条件下的大鼠进行补充替换,试验中出现最高和最低评分的大鼠,到最后整个评价系统完成时,第四组大鼠的神经功能缺损评分显著低于蛛网膜下腔出血早期脑损伤组,根据结果表现出的差异性,说明实验数据在统计学范畴内很有意义(P<0.05)。2.染色结果:实验采用的染色方法是苏木精—伊红法,在实验第一组和第二组的结果中,可见大鼠脑组织中神经元细胞结构完整,未见组织水肿,未见炎症细胞聚集。而在蛛网膜下腔出血早期脑损伤组即第三组的实验对象,可以看见大鼠脑组织的有大量神经元细胞坏死,数量较对照组减少,且有明显的炎症细胞侵润。药物干预组与蛛网膜下腔出血早期脑损伤模型组相比,可见脑组织结构更为清晰,损伤程度减轻,有更多的正常神经元细胞,炎症细胞侵润情况明显减少。3.Western Blot检测结果:蛛网膜下腔出血早期脑损伤组S1PR1的表达显著低于假手术组和正常对照组(P<0.05),TNF-α的表达则明显高于假手术组和正常对照组(P<0.05),药物干预组大鼠的S1PR1的表达显著高于假手术组和正常对照组(P<0.05),TNF-α的表达明显低于蛛网膜下腔出血早期脑损伤模型组(P<0.05)。4.real-time PCR检测结果:S1PR1(CD363)-mRNA在药物干预有明显表达,蛛网膜下腔出血早期脑损伤组S1PR1(CD363)-mRNA表达量与药物干预组相比则减弱,各组之间相比较均有显著的差异性(P<0.05)。结论:1.蛛网膜下腔出血早期脑损伤SD大鼠脑组织中S1PR1蛋白表达降低。2.依达拉奉可以促进蛛网膜下腔出血早期脑损伤SD大鼠脑组织中S1PR1蛋白的表达,可以起到减轻炎症反应,对蛛网膜下腔出血早期脑损伤大鼠的脑起到保护作用。
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