葡萄耐热性评价及不同耐热性葡萄转录组研究

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高温胁迫通常是指温度超过临界值,维持一段时间后会对植物的生长和发育造成不可逆转的伤害。通常认为如果所处温度高于适温10-15℃就会发生熟激胁迫或高温胁迫。20世纪70年代以来,全球气候变暖是一种不可避免的趋势,极端高温天气频繁发生,高温胁迫也日渐成为限制葡萄生长发育的一个重要影响因素,因此,利用植物高效的生理防御机进行耐热新品种的选育,对植物抵御高温胁迫,解决高温胁迫植物生产的影响有着重要的现实意义。植物耐热性的研究是现今国内外的研究热点,但也是一个难题,目前简单、准确、快捷、重复性好的葡萄的耐热性鉴定方法还很少;耐热材料的搜集、引进和筛选、培育工作做得不够充分;葡萄耐热遗传规律不清,耐热性机理仍然不是很清晰。本研究以葡萄(vitis)为实验材料,研究葡萄耐热性评价方法、并对种质资源进行抗热性鉴定,对杂交后代群体进行耐热性评价,研究葡萄耐热性遗传规律,对不同耐热性葡萄的转录组分析,研究不同耐热性葡萄的基因表达情况。对杂交育种中亲本的正确选择、选配具有重要的指导意义,为实施葡萄耐热基因工程培育抗高温品种奠定基础,为探明葡萄耐高温的分子机理提供理论依据。通过测定高温胁迫下叶片电解质渗透率、叶绿素荧光参数及光合放氧速率,比较不同耐热性评价方法,以期获得能有效评价葡萄叶片耐热性的鉴定指标。分析了高温胁迫对葡萄叶片PSⅡ电子传递链的影响;对47份葡萄种质资源进行抗热性鉴定;并研究了杂交组合亲本及其后代的耐热性和高温胁迫对葡萄杂交组合亲本叶片PSⅡ电子传递链的影响,研究葡萄耐热性的遗传规律;对不同耐热性葡萄进行转录组测序,研究不同耐热性葡萄的基因表达情况。主要结果如下:1.确定葡萄高温处理温度为47℃,处理时间40min。利用叶绿素荧光参数F,/Fm进行葡萄叶圆片耐热性评价。结果表明OJIP test方法是一种非常快捷、灵敏并且方便的方法。2.高温胁迫下分析葡萄叶片PSⅡ电子传递链受伤害程度,结果表明葡萄叶片PSⅡ电子传递链的供体侧和反应中心更易受到高温胁迫的伤害。3.葡萄叶片的耐热性因葡萄遗传背景的不同变化很大,野生葡萄和欧美杂交品种群葡萄叶片对高温胁迫的耐受力较强,欧亚种葡萄最不耐热。通过葡萄种质资源的耐热性评价,发现了许多耐热葡萄资源。4.葡萄叶片的耐热性属于多基因控制的数量性状,杂种后代表现广泛分离现象,群体抗高温遗传水平呈退化负向优势,杂交后代平均Fv/Fm值低于亲本值平均值,也有部分超亲本单株,非加性效应占主导地位。5.利用Illumina高通量测序技术对不同耐热性葡萄样品进行转录组测序,共获得27,556条Unigenes。通过与多种数据库进行比对注释,并对差异表达基因进行功能、代谢及调控途径分析,从整体上掌握高温胁迫相关差异基因的表达模式。通过对基因注释结果进一步分析,发现了很多可能参与响应高温胁迫的相关基因,包括响应温度胁迫、信号传导、转录因子,物质和能量代谢,次生代谢等相关基因。同时也发现了许多没有被注释的特异表达基因,这些基因可能在葡萄高温胁迫过程中起重要的调节作用。进一步对转录组数据分析和验证可帮助我们了解葡萄抗高温的分子机制。
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