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手足口病是儿童常见病,多种肠道病毒均可引起手足口病,其中以肠道病毒71型（EV71）为我国近几年手足口病的主要病原体。EV71导致的手足口病较常引起中枢神经系统损伤,重症患者比例以及病死率均明显高于其他肠道病毒,具有很重要的公共卫生意义。目前尚未有成熟的EV71快速诊断试剂和预防疫苗,开发相关诊断试剂与疫苗对于手足口病的防治具有重要意义。本研究目的是建立肠道病毒的分离鉴定技术平台,获得较为完整的EV71病毒库;建立新型的EV71中和抗体快速高通量检测方法:建立EV71动物感染模型。本研究结果将为EV71的防治研究提供重要的基础和工具。本研究通过病毒分离鉴定建立了一个较为完整的肠道病毒库,并且初步建立了EV71病毒的大规模生产,浓缩和纯化的工艺流程,已获得了具有较高滴度和纯度的EV71病毒颗粒。本研究建立了一系列EV71鉴定的方法,包括EV71滴度检测方法,免疫荧光方法,EV71中和抗体检测方法等。传统的TCID50方法是目前常用的EV71中和抗体的检测方法,该方法的实验周期长,工作量大,肉眼判断结果存在主观误差,难以满足大量标本的检测要求。鉴于传统TCID50方法所存在的问题,我们建立了快速、高通量的新型EV71中和抗体检测方法。本方法是应用酶标记的EV71单克隆抗体与EV71病毒蛋白结合,通过TMB显色使得被EV71感染的细胞显示出区别颜色标记,应用斑点自动扫描仪进行扫描和计数。本研究对该方法的敏感性,特异性,交叉反应性和重复性进行了考察,结果表明该方法具有较好的性能。同时我们应用该方法检测了大量的单抗和多抗的EV71中和抗体滴度,结果显示了该方法具有较好的应用前景。本论文也初步研究EV71的乳鼠感染模型,已经通过颅腔注射的方式将EV71病毒接种到乳鼠体内,并观察到乳鼠出现体重下降,颤抖,瘫痪甚至死亡等现象,在乳鼠的脑组织中检测到EV71病毒,为后期的疫苗研发等工作提供了基础。