长链酯酰辅酶A合成酶家族(Long-chain fatty acyl-CoA synthetases,ACSLs)是脂肪酸代谢中至关重要的酶。它能利用长链脂肪酸(C12-C22)、ATP和CoA作为底物,生成长链酯酰辅酶A酯。只有经过这种酯化反应的脂肪酸才能够进行各种脂类代谢,如脂肪酸的β氧化、去饱和、延伸以及甘油酯、胆固醇酯和磷脂的生成等。ACSLs能通过控制脂肪酸的酯化反应,对整个脂肪酸代谢起到调控作用,但目前还没有对鹅ACSL基因家族进行相关研究。本试验以四川白鹅为研究对象,采用RT-PCR方法扩增ACSLs共5个亚型的CDS全序列并进行了生物信息学分析;运用荧光实时定量PCR技术,研究了四川白鹅ACSLs五个亚型的mRNA组织表达规律;用不同浓度棕榈酸培养鹅原代肝细胞,检测ACSLs各亚型mRNA表达变化并对其生物学功能进行了的初步推测与分析。研究结果如下:(1)四川白鹅ACSLs五个亚型基因CDS区长分别为:2100 bp(ACSL1)、2136bp(ACSL3)、2013 bp(ACSL4)、2052 bp(ACSL5)、2097 bp(ACSL6)。同源性比对分析表明:鹅ACSLs五个亚型与鸡的同源性均为最高,核苷酸同源性达89.7%以上,氨基酸同源性达90.4%以上。(2)经过生物信息学分析,发现鹅ACSLs基因与哺乳动物一样,也存在两个保守功能区(ATP/AMP motif和FACS motif)。不同亚型功能区中的序列变异情况差异较大,但均存在几个保守的氨基酸位点。如FACS区域中第2位和第7位的甘氨酸残基,在ACSL1中保守性极高。色氨酸(第3位)、苏氨酸(第6位)、天冬氨酸(第8和22位)、精氨酸(第23位)和赖氨酸(第25位)在鹅和其他物种ACSLs基因的五个亚型中完全一致。(3)对鹅ACSLs进行mRNA组织表达分析显示:ACSL1主要在脂肪组织中表达,ACSL3、ACSL4和ACSL6主要在大脑中表达,ACSL5主要在小肠和肝脏中表达。(4)棕榈酸能影响鹅原代肝细胞的脂肪酸代谢。随着棕榈酸浓度的升高,肝细胞中脂滴变的明显,细胞内TG含量逐渐增加,肝细胞活性随着棕榈酸浓度的升高而先上升再降低。在0.8 mmol/L棕榈酸处理组中,细胞活性被极显著降低(P＜0.01)。表明棕榈酸对鹅肝细胞的脂滴形成有促进作用,但浓度过高时,会引起细胞的死亡。(5)不同浓度棕榈酸均能改变ACSLs基因的mRNA表达。其中,ACSL6在肝细胞中不表达,ACSL1和ACSL3在0.4 mmol/L棕榈酸处理时表达量显著上调(P＜0.05和P＜0.01);ACSL4和ACSL5在0.2 mmol/L棕榈酸处理时表达量极显著增加(P＜0.01)。