目的诱导C57BL/6小鼠建立实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)动物模型,应用绞股蓝总皂苷(Gypenosides,GPs)进行干预,观察小鼠神经功能行为改变、视神经及视网膜形态学改变、视网膜神经节细胞(Retinal Ganglion Cells,RGCs)凋亡情况,探讨GPs对EAE小鼠视神经及视网膜的保护作用。方法应用MOG35-55多肽加完全弗氏佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,实验分为正常对照组、EAE模型组、GPs干预组、甲基强的松龙组(MP组)、GPs与甲基强的松龙联合干预组(COM组)。自免疫后第7天起,GPs干预组每天给予腹腔内注射GPs 30mg/kg,连续给药至动物处死;MP组每天给予腹腔内注射甲基强的松龙20mg/kg,连续给药3天;COM组每天给予腹腔内注射甲基强的松龙20mg/kg,连续给药3天,给予腹腔内注射GPs 30mg/kg,连续给药至动物处死。每天称量小鼠体重,观察记录神经功能表现、评分,于免疫后第7天进行视觉诱发电位检查;于免疫后第14天、第20天、第30天、第40天进行OCT检查,于免疫后第20天、第40天取小鼠视神经及视网膜组织制成石蜡切片,采用HE染色评估视神经、视网膜炎性细胞浸润情况,TUNEL法检测RGCs凋亡改变。结果1、发病时间、评分:正常对照组小鼠未出现症状;实验组小鼠于免疫后一周左右体重稍有下降,后逐渐增长;实验组小鼠于免疫后第9天起陆续发病。EAE组小鼠发病率为100%,神经功能评分较高,病情最严重;GPs组发病率为97%,COM组、MP组发病率均为90%。COM组可推迟发病时间,与EAE组相比,差别具有统计学意义。正常对照组小鼠评分均为0分,免疫后第14天,COM组与EAE组相比,症状较轻,评分较低,差别具有统计学意义;在其余各时间段三组药物干预组小鼠症状评分与EAE组相比,总体评分较低,但差别无统计学意义。2、VEP:正常对照组、EAE组小鼠免疫后第7天VEP检查结果显示EAE组小鼠的N1波潜伏期、P1波潜伏期、P2波潜伏期均较正常对照组延长,P1波振幅较正常对照组下降,差别具有统计学意义(P<0.05);而N2波潜伏期、P2波振幅与正常对照组相比无明显差异。3、OCT:免疫后第20天,EAE组RNFL与正常对照组、三个药物干预组相比明显变薄,差别具有统计学意义;三个药物干预组之间对比差异不大,且均与正常对照组相似厚度,无统计学差异。免疫后第30天,EAE组RNFL进一步变薄,EAE组、MP组RNFL与正常对照组相比均明显变薄P<0.01,EAE组为甚,正常对照组、GPs组、COM组相似厚度,无统计学差异;三个药物干预组均较EAE组厚,具有统计学差异;MP组较GPs组、COM组薄,差别具有统计学意义。免疫后第40天,EAE组、MP组RNFL进一步变薄,GPs组、COM组相似厚度且均与正常对照组相似厚度,无统计学差异;GPs组、COM组均较EAE组、MP组为厚,具有统计学差异。4、HE染色:正常对照组小鼠视网膜结构排列整齐,染色均匀,未发现有炎性细胞浸润;视神经纵切面HE染色均匀,神经纤维整齐均匀排列,未观察到有炎性细胞浸润现象。于小鼠免疫后第20天,EAE组视网膜、视神经可见较多数量的炎性细胞浸润,水肿较明显,神经纤维排列紊乱,大量空泡形成;三个药物干预组炎性浸润程度相似且均较EAE组少见,水肿较轻。于小鼠免疫后第40天,各组小鼠视神经、视网膜的炎性细胞浸润均较前减少,水肿较前减轻,三个药物干预组与EAE组相比,神经节细胞层水肿较轻,炎性细胞也较少见。可见EAE组、MP组RGCs较前明显减少,排列疏松。5、TUNEL染色:正常对照组小鼠几乎未观察到RGCs凋亡;实验组均可见不同程度的RGCs凋亡,其中以EAE组、MP组最为明显,且随着时间的推移,凋亡细胞数目逐渐增多,与正常对照组相比具有显著差异。GPs组、COM组凋亡细胞相对较少,随着药物干预时间的延长,存活的RGCs较EAE组多。结论(1)绞股蓝总皂苷与甲基强的松龙联合运用可推迟EAE小鼠的发病;(2)绞股蓝总皂苷单独或与甲基强的松龙联合运用可阻止EAE病变中视网膜神经纤维层变薄,对其起到保护作用;(3)绞股蓝总皂苷可减轻EAE炎症反应;(4)绞股蓝总皂苷可减少EAE视网膜神经节细胞凋亡,起到神经保护作用。