【摘 要】
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【背景】Cell-in-cell（CIC）是指一个或以上的活细胞进入另一个活细胞的胞浆内,形成细胞套叠结构的现象。近年来随着科学研究技术的迅速发展,CIC的结构在正常生理、炎症、自身免疫及肿瘤等多种生物行为过程中均可发现,并提示其不同的生物学意义。CIC通常根据内化细胞的种类分为两类:一类是同质细胞间（homotypic CIC）;另一类是异质细胞间（heterotypic CIC）。近年来,越来
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【背景】Cell-in-cell（CIC）是指一个或以上的活细胞进入另一个活细胞的胞浆内,形成细胞套叠结构的现象。近年来随着科学研究技术的迅速发展,CIC的结构在正常生理、炎症、自身免疫及肿瘤等多种生物行为过程中均可发现,并提示其不同的生物学意义。CIC通常根据内化细胞的种类分为两类:一类是同质细胞间（homotypic CIC）;另一类是异质细胞间（heterotypic CIC）。近年来,越来越多的肿瘤组织中存在的CIC结构均有报道,且不同类型的淋巴细胞和不同类型的肿瘤细胞间均可形成CIC结构,且无细胞种系来源间的限制。科学家们猜测heterotypic CIC的发生也参与了肿瘤形成的机制:淋巴细胞进入肿瘤细胞（即靶细胞）后,一方面影响靶细胞有丝分裂过程,导致靶细胞异倍体或多核的形成,提示了heterotypic CIC可能促进肿瘤的发生发展;另一方面大部分淋巴细胞会在肿瘤细胞内以emperitosis方式死亡,又提示肿瘤倾向于清除对自身生长不利的淋巴细胞,从而逃避免疫监控。由此认为heterotypic CIC的出现常提示预后不良,且与预后不良呈正相关。结直肠癌（colorectal cancer,CRC）的发生发展是个多因素、多步骤的过程。CIC对CRC侵袭转移有何影响?本研究主要通过建立人外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）-人肠癌细胞HCT-8的PBMC-肿瘤细胞间形成的heterotypic CIC模拟体内过程,借助流式细胞分选技术分离出纯CIC细胞结构,探究PBMC钻入CRC细胞形成CIC结构后,对其侵袭转移的能力的影响,进一步揭示CRC发生发展的分子机制。【目的】1.从人外周血中提取PBMC与人肠癌细胞共孵育模拟体内CRC中CIC的形成;2.分析形成CIC结构后肠癌细胞功能的变化;3.试探讨PBMC钻入肠癌细胞形成CIC结构影响CRC细胞功能变化的相关分子机制。【方法】1.提取、培养人PBMC并与肠癌细胞共孵育。2.利用流式细胞分选共孵育后的三组肠癌细胞:PBMC钻入后形成CIC结构的（CIC组）、未与PBMC共孵育的肠癌细胞（对照组一）及与PBMC共孵育但无PBMC钻入的（对照组二）,并培养。3.Transwell实验检测三组细胞迁移能力、基质胶-Transwell实验检测三组细胞侵袭能力,并用Western Blot检测三组细胞侵袭、转移相关蛋白表达差异。4.CCK-8细胞毒性实验筛选SB203580小分子抑制剂最佳浓度,抑制CIC组细胞p-p38蛋白表达,使用Western Blot检测其抑制效率,并用Transwell实验检测细胞迁移能力、基质胶-Transwell实验检测细胞侵袭能力。分析与未抑制p-p38的CIC（对照组）比较,抑制p-p38后CIC细胞迁移侵袭的改变。【结果】1.PBMC可与肠癌细胞发生CIC结构,比例大约为1～2%,且其中各亚群淋巴细胞均可钻入其内。2.CIC组肠癌侵袭与迁移能力明显强于对照组一、对照组二（侵袭实验:CIC vs对照组一p＜0.0001,CIC vs对照组二p＜0.0001,对照组二vs对照组一p=0.372;迁移实验:CIC vs对照组一p＜0.0001,CIC vs对照组二p＜0.0001,对照组二vs对照组一p=0.192）,并且高表达与侵袭转移相关的MAPK通路里的p-p38蛋白（CIC vs对照组一p=0.001,CIC vs对照组二p=0.028）。3.与对照组CIC相比,使用p-p38小分子抑制剂后的CIC组侵袭与迁移能力明显减弱（侵袭实验:抑制后CIC vs对照组CIC p＜0.0001,抑制后CIC vs DMSO p＜0.0001;迁移实验:抑制后CIC vs对照组CIC p＜0.0001,抑制后CIC vs DMSO p＜0.0001）。发生CIC后的肠癌细胞可能通过MAPK通路增强其侵袭转移能力。【结论】PBMC-肿瘤细胞间CIC促进了侵袭转移能力,CIC促进侵袭转移是通过p38磷酸化实现的。
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