脱细胞骨骼肌支架与雪旺细胞构建体外人工神经模型的研究

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目的:研究Waller变性对雪旺细胞活性的影响,探索来源于自体骨骼肌组织的脱细胞支架和自体激活态的雪旺细胞作为种子细胞的混合培养物作为一种神经桥接物的可行性,寻找一种周围神经受损伤后修复的新方法。方法:将实验组SD大鼠左侧坐骨神经进行结扎,使其发生Waller变性,7d后将实验组与正常对照组同侧的坐骨神经进行S-100蛋白免疫组织化学染色,观察变性对坐骨神经的影响,计算雪旺细胞阳性率,进行统计学比较;雪旺细胞在周围神经受损修复过程中发挥着重要的作用,已成为学者们公认的人工神经的种子细胞。本实验将SD大鼠坐骨神经来源的雪旺细胞在体外培养、扩增与纯化,对其行S-100蛋白免疫细胞化学染色鉴定及绘制其生长曲线;且对自身股二头肌分别用3%Triton X-100溶液和4%Deoxycholate钠盐溶液进行化学萃取,制备脱细胞骨骼肌支架,并经HE染色及扫描电子显微镜进行形态学观察,最终将雪旺细胞与经无菌多聚赖氨酸预处理的脱细胞支架进行混合培养两周后,用扫描电子显微镜观察两者的结合情况。结果:Waller变性后7d,实验组坐骨神经发生与经典Waller变性相符的改变,实验组的S-100蛋白阳性率明显高于正常对照组,两者相比具有显著性差异(P<0.05);取材于SD大鼠坐骨神经在体外培养所得的雪旺细胞,S-100蛋白染色呈特征性阳性;取材于骨骼肌的脱细胞支架,观察具有适合雪旺细胞生长的相对规则的孔隙;雪旺细胞与脱细胞骨骼肌支架混合培养后,细胞在支架上附着良好,且细胞首尾相联,出现类似Büngner带的雪旺细胞链。结论:周围神经组织工程学研究中可以利用Waller变性获得激活态的雪旺细胞;在体外,雪旺细胞能在脱细胞骨骼肌支架上生长良好,符合体外人工神经的要求。
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