论文部分内容阅读
背景:消化肿瘤的病死率较高且总体呈上升趋势,目前尚缺乏可靠的诊断标志物。存在于肿瘤患者外周血的自抗体(autoantibodies)和循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)是一种新型的诊断标志物,与肿瘤的进展及预后相关,日益成为肿瘤液体活检的重要内容。食管癌和胃癌等消化肿瘤具有显著的人群和地域差异,提示基因-环境因素及其交互作用在肿瘤发生发展中扮演重要角色。目的:了解食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者血清自抗体谱,筛选新的可用于食管癌早期诊断的自抗体标志物;探索中国人群胃癌中基因-环境的交互作用,研究GWAS发现的七个易感位点与幽门螺旋杆菌(Helicobacter Pylori,H.pylori)感染、吸烟和饮酒之间潜在的交互作用对胃癌发病风险:建立基于细胞表面vimentin(cell-surface vimentin,csVim)的实体肿瘤细胞上皮间叶转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)样循环肿瘤细胞检测技术,认识食管癌不同表型的CTC和肿瘤进展的关系。材料和方法:本研究使用包含有19,394种人重组蛋白的人类蛋白质组芯片筛选食管癌患者和健康对照个体血清中肿瘤相关自抗体谱,鉴定与食管癌早期诊断和淋巴结转移相关的自抗体标志物;采集1,273例淮河流域胃癌高发区肿瘤和健康对照个体外周血样本,分离血清并提取基因组DNA,对七个易感位点做基因分型并检测H.pylori感染状况,分析基因-环境交互作用与胃癌风险的关系;采集单纯手术治疗的食管癌患者术前外周血样本,负性富集CTCs并制备滴片,建立基于csVim的实体肿瘤细胞EMT样CTC的检测技术。结果:共筛选到201种与食管癌早期诊断相关的自抗体和120种与食管癌淋巴结转移相关的自抗体谱。进一步在食管癌(n=40)和健康对照(n=19)血清中验证了 BACH1、RAD23B和PNMA2三种候选自抗体标志物,其在食管癌和健康对照血清中含量具有显著差异(P<0.05),可能作为潜在的食管癌诊断标志。敲降BACH1,显著抑制食管癌KYSE 510细胞的迁移和侵袭能力,以及转移相关基因MMP1和CXCR4的表达;发现PSCA rs2294008/rs2976392与H.pylori感染与胃癌风险显著互关。同时,PRKAAl rs13361707与H.pylori感染存在加法交互作用,SLC52A3 rs13042395与饮酒存在相互作用;在具有EMT样表型的食管癌细胞中csVim的表达显著增高,食管癌患者外周血EMT样CTC检出率为46.7%(14/30),占CTC检出率的73.7%(14/19)。EMT样CTC数目在伴有淋巴结转移的食管癌患者中升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:食管癌患者血清中肿瘤相关自抗体有可能作为辅助食管癌早期诊断的标志物;GWAS鉴定到的遗传多态位点可能与环境因素,特别是H.pylori感染和饮酒等存在交互作用增加胃癌风险;食管癌患者外周血EMT样CTC含量与肿瘤进展相关,有可能作为判断食管癌淋巴结转移的潜在标志,辅助监测病情进展。