【摘 要】
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目的验证蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2在小鼠1-细胞期受精卵存在相互作用,进而研究其对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为探讨蛋白激酶Pkmyt1对哺乳动物胚胎早期发育调控的机制奠定
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目的验证蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2在小鼠1-细胞期受精卵存在相互作用,进而研究其对小鼠1-细胞期受精卵发育的影响,为探讨蛋白激酶Pkmyt1对哺乳动物胚胎早期发育调控的机制奠定基础。方法1、利用免疫共沉淀方法验证蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2在细胞内存在相互作用。2、利用GST pull down方法验证蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2间在体外存在相互作用。3、免疫荧光实验观察蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2蛋白在小鼠1-细胞期受精卵的共定位情况。4、Real-time PCR检测小鼠1-细胞期受精卵中RASAL2 mRNA的表达水平。5、免疫荧光实验观察RASAL2在小鼠1-细胞期受精卵中的定位情况。6、显微注射RASAL2-mRNA,观察其对小鼠1-细胞期受精卵卵裂率的影响。结果1、免疫共沉淀结果证实蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2在细胞内存在相互作用。2、GST pull down结果证实蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2在体外存在相互作用。3、免疫荧光观察到蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2在小鼠1-细胞期受精卵中存在共定位。4、Real-time PCR检测到RASAL2 mRNA在小鼠1-细胞期受精卵各个时期均有表达,在S期表达增多,G2期表达开始减少。5、免疫荧光结果观察到RASAL2在小鼠1-细胞期受精卵中主要表达在细胞浆中,M期在细胞浆和细胞核中均有表达。6、过表达RASAL2抑制小鼠1-细胞期受精卵卵裂。结论本研究证实蛋白激酶Pkmyt1与RASAL2存在相互作用,且在小鼠1-细胞期受精卵中存在共定位。RASAL2的mRNA在小鼠1-细胞期受精卵各个时期动态表达,且过表达RASAL2抑制小鼠1-细胞期受精卵卵裂,提示在小鼠受精卵中蛋白激酶Pkmyt1可能通过与RASAL2相互作用进而调控小鼠受精卵早期发育。
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