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目的:建立小鼠茄病镰刀菌(Fusarium solani,F.solani)性角膜炎模型,通过观测小鼠真菌性角膜炎(fungal keratitis;FK)的发病进程,干扰素γ(IFN-γ)治疗小鼠真菌性角膜炎后角膜病理变化及炎症因子表达情况,评价IFN-γ对小鼠真菌性角膜炎的治疗效果,以进一步阐述真菌性角膜炎的发生发展机制,及与机体内在免疫的关系,为今后真菌性角膜炎的治疗及免疫学防治提供新的研究思路。方法:取8周龄BALB/C雄性小鼠,小鼠均用改良表层镜面法在右眼接种茄病镰刀菌,左眼不做处理,将建立小鼠角膜炎模型成功且严重程度相同的小鼠120只随机分为2组,A组(PBS滴眼组):即对照组,右眼接种茄病镰刀菌,接种成功后每天滴含0.1%BSA的PBS,4次/日;B组(IFN-γ滴眼组):即实验组,右眼接种茄病镰刀菌,接种成功后每天滴2.5×105U/mL含0.1%BSA的IFN-γ,4次/日。两组小鼠感染茄病镰刀菌后的1、3、5、7、10天五个时间点对小鼠进行观察和检测,观察并记录小鼠角膜感染真菌后的角膜裂隙灯下大体病变特点和临床评分,免疫荧光染色检测感染后角膜中巨噬细胞表面抗原F4/80+及CD4+细胞表达情况,Real Time-PCR检测小鼠角膜中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)以及Th1细胞IFN-γ和IL-12,Th2细胞IL-4和IL-10基因的mRNA相对表达;ELISA检测角膜中巨噬细胞移动抑制因子(MIF)蛋白的表达量。结果:感染真菌性角膜炎后滴IFN-γ能显著降低角膜组织的病理改变,降低角膜病变临床评分,缩短真菌性角膜炎的病程,B组(IFN-γ滴眼组)的临床评分在第5天、7天、10天A组(PBS滴眼组)相比差异有统计学意义(p<0.01)。小鼠角膜的真菌载量检测结果显示,两组小鼠在接种真菌后,小鼠角膜真菌载量均随着时间的推移呈现整体下降的趋势,且在第5天B组的真菌感染小鼠角膜中真菌载量少于a组(p<0.01),表明ifn-γ滴眼有利于真菌清除,缩短病程。具体来说,第1天,两组小鼠角膜真菌载量未见明显差异;第3天b组角膜真菌载量较a组少,但统计学分析无明显差异;第5天,b组真菌载量明显少于a组,差异有统计学意义(p<0.05)。第7天和第10天两组小鼠角膜匀浆均未检测出真菌。免疫荧光结果显示,b组(ifn-γ滴眼组)的真菌感染小鼠角膜中巨噬细胞表达早期即多于a组(pbs滴眼组),表明ifn-γ滴眼有利于激活机体免疫,加速真菌病原体的清除。b组小鼠fk角膜在第1天、3天、5天、7天、10天五个时间点均可见f4/80+细胞(红色荧光)的表达,且在荧光强度均高于a组;而a组在第5天、7天和第10天几乎无f4/80+细胞表达。cd4+细胞(绿色荧光)在a组表达不明显,而b组在第1天、3天、5天、7天可见少量表达cd4+的细胞(绿色荧光)在a组表达不明显,仅在第1天和3天有少量表达;而b组在第1天、3天、5天、7天、10天均可见少量表达。real-timepcr结果显示,b组fk角膜中il-4的浓度在各个时间点均比b组显著降低(各时间点差异均有统计学意义,p<0.05),且趋势与a组从第1天开始缓慢上升至第7天后,在第10天大幅度下降不同,b组il-4浓度随着时间的推移缓慢下降。角膜中il-10和ifn-γ两个因子的浓度趋势大致相同,随着病程的发展呈现增高后又降低的趋势,但b组两个因子浓度达到高峰早于a组,且下降幅度也大于a组,b组在第7天角膜中的il-10和ifn-γmrna均显著低于另a组,差异有统计学意义(p<0.05)。il-12的浓度趋势在a组表现不明显,而b组小鼠角膜中il-12的浓度呈现明显随时间发展上升后又下降的趋势,且在第5天达到高峰,于第3天和第5天明显高于另a组(p<0.01)。mip-2的表达在两组中随着时间推移表达均越来越低,但在b组中mip-2的表达量在各个时间点均显著多于a组(差异均有统计学意义,p<0.05)。b组小鼠角膜中mif表达量显著高于a组,且在第1天、3天和5天差异有统计学意义(p<0.05)。经ifn-γ滴眼后真菌感染的小鼠角膜中il-4/il-12mrna的比例显著降低(各时间点差异有统计学意义,p<0.05)。elisa结果表明ab两组中小鼠角膜中mif蛋白表达均呈随着病程进展上升后又下降的趋势,但在3天和5天b组的小鼠角膜中mif蛋白表达高于a组的小鼠,差异有统计学意义(p<0.01)。结论:本实验结果显示,IFN-γ滴眼治疗的小鼠真菌性角膜炎能够帮助机体更快地清除角膜中的真菌,增加角膜中巨噬细胞的聚集和浸润,使机体免疫向Th1方向偏移,缩短小鼠真菌性角膜炎的病程。