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目的:探讨RAW264.7细胞荷脂过程中adipophilin是否与ACAT1/nCEH相互结合,阐明adipophilin引起巨噬细胞内脂质积聚的机制。 方法:应用生物信息学预测 adipophilin与ACAT1和 nCEH是否相关;50μg/ml Ox-LDL孵育RAW264.7细胞0、0.5、1、3、6h,应用油红O染色观察细胞荷脂状况;应用RT-PCR技术检测adipophilin、ACAT1和nCEH的mRNA的表达;应用Western Blot技术检测 adipophilin、ACAT1和 nCEH蛋白的表达;应用免疫共沉淀技术检测adipophilin与ACAT1/nCEH是否相互结合。 结果:生物信息学预测显示adipophilin与ACAT1和nCEH存在关联。油红O染色显示,与Ox-LDL孵育过程中,RAW264.7细胞内脂质显著增加。RT-PCR和western blot显示,adipophilin、ACAT1和nCEH的mRNA和蛋白质随着时间的延长而增多,与0h表达相比,差异有显著性(P<0.05,n=3)。 免疫共沉淀显示,RAW264.7细胞与Ox-LDL孵育0h、0.5h、1h、3h时adipophilin与ACAT1结合,6h时adipophilin与ACAT1不结合;孵育0h、0.5h、1h时adipophilin与nCEH不结合,3h、6h时与nCEH结合。 结论:在荷脂的RAW264.7细胞中 adipophilin与ACAT1/nCEH相互结合。adipophilin在促使细胞内脂质蓄积过程中,与ACAT1/nCEH可能协同作用。