论文部分内容阅读
细胞抗病毒天然免疫反应是细胞防御病毒感染产生的自我保护反应。细胞被病毒感染后,模式识别受体(pattern recognition receptor, PRR)识别病原相关分子模式(pathogen-associated molecular pattern, PAMP),启动Ⅰ型干扰素表达。Ⅰ型干扰素通过JAK-STAT信号通路诱导下游抗病毒基因表达,这些蛋白共同参与细胞抗病毒天然免疫。Ⅰ型干扰素的表达依赖多种转录因子的共同参与,其中IRF3 (interferon-regulatory factor 3)和NF-κB尤其重要。识别病毒PAMP的PRR包括Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)、RIG-I样受体(RIG-I-like receptor, RLR)和DNA受体。TLRs识别病毒组分后,通过MyD88依赖型信号通路或TRIF依赖型信号通路分别激活NF-κB和IRF3,进而诱导Ⅰ型干扰素表达。而RLRs则通过RNA结合结构域识别病毒dsRNA,利用级联激活和招募结构域(caspase activation and recruitment domain, CARD)结合下游接头蛋白VISA (virus-induced signaling adaptor) o VISA通过招募不同的蛋白形成VISA复合物分别激活NF-κB和IRF3。一方面,VISA利用TRAF结合结构域(TRAF interaction motifs)招募TRAF2 (tumor necrosis factor receptor 2)和TRAF6 (tumor necrosis factor receptor 6),然后TRAF2和TRAF6泛素化RIP1和NEMO/IKKy,激活IKK (inhibitor ofκB kinase)复合物和NF-κB信号通路；另一方面VISA结合TRAF3、MITA (mediator of IRF3 activator)、TBK1 (TRAF familymember-associated NF-κB activator-binding kinase 1),激活IRF3信号通路,NF-KB和IRF3结合到Ⅰ型干扰素基因启动子上,诱导Ⅰ型干扰素表达。机体通过一系列的蛋白修饰调节细胞抗病毒免疫反应,其中,泛素化和去泛素化修饰是重要的调控手段。例如E3泛素链接酶TRIM25通过K63-连接的泛素链修饰RIG-Ⅰ,辅助RIG-Ⅰ招募VISA。因此,我们推测有未知蛋白通过泛素化或去泛素化作用参与病毒诱导的Ⅰ型干扰素信号通路。在本研究中,我们鉴定出两个去泛素化酶--OTUB1和OTUB2,负调控病毒诱导的Ⅰ型干扰素信号通路。过表达OTUB1和OTUB2抑制由病毒诱导的ISRE、NF-κB、IFNβ启动子的激活和IFNB1及其下游细胞因子RANTES的表达。与之相对应,通过siRNA技术减少内源性OTUB1和OTUB2的表达,不仅能有效地促进仙台病毒(sendai virus,SeV)诱导的IFNβ的表达,而且能显著抑制水泡口炎病毒(vesicle stomatitis virus, VSV)的复制。免疫共沉淀实验显示,OTUB1和OTUB2参与病毒诱导的Ⅰ型干扰素信号通路中非常重要的复合物——VISA复合物的形成。进一步的研究结果表明,OTUB1和OTUB2特异性去泛素化TRAF3和TRAF6。这些实验显示：OTUB1和OTUB2通过去泛素化TRAF3和TRAF6负调控病毒诱导的Ⅰ型干扰素信号通路。