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目的:研究半枝莲醇提物对结直肠肿瘤干细胞自我更新和分化的体内和体外的影响,从非经典Hedgehog信号通路阐明其分子机制,为半枝莲抗结直肠肿瘤提供新的实验基础。方法:（1）以野黄芩苷作为对照品,采用高效液相色谱法（HPLC）对半枝莲进行质量评价;（2）用pLV-U6-hSMOshRNA-EGFP慢病毒转染结直肠肿瘤HT-29细胞,筛选转染成功的HT-29Smo-细胞;采用磁珠抗体标记法分选出结直肠肿瘤干细胞(HT-29Smo-CSC)（3）采用cck-8法检测半枝莲对肿瘤干细胞活性的影响;（4）3D培养法检测半枝莲对HT-29Smo-CSC生长状态的影响;（5）干细胞成球实验研究半枝莲对HT-29Smo-CSC体外自我更新的影响;（6）软琼脂集落实验研究半枝莲对HT-29Smo-干细胞生长转化的影响;（7）分化实验研究半枝莲对HT-29Smo-CSC体外分化的影响（8）qRT-PCR法检测半枝莲对对非经典Hedgehog信号通路基因Shh、Ptch1、Gli1和Sufu,肿瘤干细胞标记基因CD133,靶基因c-Myc,分化基因CK20,增殖基因Ki67,更新基因Nanog的影响;（9）Wester Blot法检测半枝莲对HT-29Smo-CSC中相关蛋白Gli1、c-Myc、Shh的影响;（10）采用BALB/c裸鼠接种结直肠癌HT-29Smo-CSC,构建皮下移植瘤模型,分别药物干预处理24天,通过检测移植瘤体积和重量研究半枝莲对结直肠癌HT-29Smo-CSC移植瘤生长的影响;（11）qRT-PCR法检测裸鼠移植瘤Shh、Ptch1、Gli1、Sufu、CD133、c-Myc、CK20、Ki67、Nanog mRNA的水平;（12）Wester Blot检测裸鼠移植瘤中Gli1、c-Myc、Shh蛋白的表达;（13）IHC法检测裸鼠移植瘤Gli1、c-Myc、Ki67、CD133蛋白的表达。结果:（1）半枝莲中总黄酮含为1.29%,野黄芩苷含量为0.26%;（2）慢病毒转染后的HT-29细胞现绿色荧光,Smo蛋白不表达;（3）半枝莲醇提物能抑制HT-29Smo-CSC体外活性,且具有剂量依赖;（4）半枝莲能够显著抑制HT-29Smo-CSC体外成球能力,（5）半枝莲能显著抑制3D培养的HT-29Smo-CSC的生长,并且浓度越大,形态越差;（6）半枝莲能显著抑制HT-29Smo-CSC生长转化（P<0.05）;（7）半枝莲能抑制HT-29Smo-CSC体外分化能力;（8）半枝莲能上调Sufu基因,下调Hh信号通路基因Shh、Ptch1、Gli1,肿瘤干细胞标记基因CD133,靶基因c-Myc,分化基因CK20,增值基因Ki67,更新基因Nanog的表达水平;（9）半枝莲能显著下调Gli1、c-Myc、Shh蛋白的表达;（10）半枝莲能抑制结肠癌裸鼠移植瘤的生长;（11）半枝莲能显著上调移植瘤中Sufu,下调Shh、Ptch1、Gli1、CD133、c-Myc、CK20、Ki67、Nanog mRNA的表达;（12）WB结果显示半枝莲能够降低裸鼠移植瘤中Gli1、c-Myc、Shh蛋白的表达;（13）IHC结果表明半枝莲能够降低裸鼠移植瘤中Gli1、c-Myc、Ki67、CD133蛋白的表达。结论:半枝莲醇提物能够抑制HT-29Smo-CSC的增殖和分化,对非经典Hedgehog信号通路关键靶基因和蛋白有明显抑制作用,显示半枝莲能通过非经典Hedgehog信号通路抑制结直肠肿瘤干细胞自我更新和分化。