【摘 要】
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该研究选用基因工程干扰素α-2b(α-2bIFN)为实验对象,利用免疫磁性微球技术对其进行分离纯化研究.该研究首先制备了抗α-2bIFN(Anti-IFN-IgG)和抗聚合α-2bIFN(Anti-PIFN-Ig
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该研究选用基因工程干扰素α-2b(α-2bIFN)为实验对象,利用免疫磁性微球技术对其进行分离纯化研究.该研究首先制备了抗α-2bIFN(Anti-IFN-IgG)和抗聚合α-2bIFN(Anti-PIFN-IgG)血清,经分级盐析、DEAE-cellulose 52离子交换层析分别精制IgG抗体.以Ante-PIFN-IgG为固相抗体,以生物素标记的Anti-IFN-IgG为示踪抗体,建立了α-2bIFN的夹心式酶联免疫测定法(sandwich ELISA).将Anti-IFN-IgG抗体与CNBr Activated Sepharose-4B偶联,制备了亲和层析柱,并对α-2bIFN粗提物进行亲和层析纯化.分别采用反相悬浮包埋法和种子聚合法制备了粒径为50-100μm的琼脂糖磁性微球和聚苯乙烯磁性微球,以其为载体考察抗体的致敏条件和免疫磁性分离条件.结果表明琼脂糖磁性微球经环氧氯丙烷活化后,引入戊二醛侧臂连接Anti-IFN-IgG抗体,抗体偶联量达到8.4mg/ml,高于用物理吸附法致敏的聚苯乙烯磁性微球(1.84mg/ml).该研究结果表明,免疫磁性微球技术可直接从简单处理的菌体发酵液样品中一步纯化得到高纯度的目的蛋白α-2bIFN,操作简便、快速,为α-2bIFN的分离纯化提供了一条新的途径.
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