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宫颈癌的发病率、死亡率占妇科恶性肿瘤第一位。放射治疗是主要治疗手段之一。宫颈癌对放射治疗的敏感性直接影响其疗效与预后。放射线主要是通过导致DNA双链断裂(DNA double-strand break, DSB)起到杀死肿瘤细胞的作用。但细胞具有较高程度的DSB修复能力,修复方式有两种:以DNA依赖蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase, DNA-PK,包括Ku80/ Ku70异二聚体和DNA-PK催化亚单位DNA-PKCs)为主的非同源性末端连接(DNA nonhomologous end-joining, NHEJ)和以ATM (ataxia-telangiectasia mutated)为主的同源重组(homologous recombination)修复。Ku蛋白能与DNA末端及DNA损伤导致的双链DNA断裂(DSBs)末端结合。Ku蛋白是重组修复系统中最重要的组成部分,在DSBs的同源性末端连接和非同源性末端连接修复途径中发挥重要作用,尤以NHEJ为著。Ku蛋白广泛存在于哺乳动物细胞内,最初在多肌炎硬皮病重叠综合征病人体内作为自身抗原被发现,它是由70kDa和80kDa两条多肽链组成,分别被称之为Ku70和Ku80。Ku70亚单位由609个氨基酸组成,分子量约69581Da,Ku80包括732个氨基酸,分子量约81914Da。两个亚单位都有类似亮氨酸拉链结构序列的亮氨酸或亮氨酸-色氨酸周期性重复,这种拉链结构被认为是DNA连接蛋白家族的标志,参与DNA转录调节。Ku异二聚体是参与DNA DSB修复中非同源末端连接途径(NHEJ)的关键酶DNA-PK的催化亚基,在DNA DSB修复和v(D)J重组中起关键作用,编码Ku异二聚体的Ku基因是人鼠同源基因。二聚体之一的Ku70与细胞的电离辐射敏感性、化学药物敏感性、某些肿瘤的发生与进展、细胞凋亡以及衰老均有关系。动物实验研究发现:Ku70蛋白在DSB修复、免疫球蛋白v(D)J重组、DNA复制、转录、热休克反应和端粒体末端精确结构调节等过程中均发挥重要作用。近年来对Ku70蛋白的基因结构和多种功能研究取得新进展,尤其是Ku70蛋白的活性与肿瘤的发生发展相关引起人们的极大关注。本研究采用RNA干扰(RNAi)技术抑制Hela细胞中Ku70蛋白的表达,观察Ku70蛋白表达下调对Hela细胞放射敏感性的影响。实验结果表明,宫颈癌Hela细胞对1.0~4.0Gyγ射线照射不够敏感,有相当高的辐射抗性。量效实验证实,1.0~6.0Gyγ射线照射后,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。时效实验证实,4.0Gyγ射线照射后8 h~72 h,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高。本实验成功的构建了Ku70基因RNA干扰载体pSilencer-4.1-Ku70,稳定转染HeLa细胞后,有效抑制Ku70蛋白的表达。稳定转染pSilencer-4.1-Ku70干扰质粒并抑制Ku70蛋白表达后,HeLa细胞对γ射线照射的放射敏感性显著增高(P<0.001)。本文所得结果将为宫颈癌的基因治疗及放射治疗提供新的实验依据。具有重要的理论意义及潜在的应用价值。Ku70基因有望作为宫颈癌基因治疗的新靶点。