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目的: 采用慢性轻度不可预见性的应激抑郁大鼠模型,观察β-细辛醚对ERK1/2信号通路的负调控蛋白MKP-1的表达情况的影响,进一步研究β-细辛醚抗抑郁作用的靶点,从而揭示β-细辛醚抗抑郁作用的机制,为研发新型抗抑郁药提供新思路。 方法: 4~5月龄的Sprague-Dawley雄性、清洁级健康大鼠,适应性喂养一周。通过敞箱实验,将60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组和β-细辛醚组,共4组,每组15只。正常对照组5只1笼,常规饲养,不给予任何刺激与治疗。模型组、氟西汀组和β-细辛醚组大鼠1只1笼,孤养,并给予21d慢性轻度不可预见性应激刺激。在造模的同时,氟西汀组大鼠给予氟西汀干预,β-细辛醚组大鼠给予β-细辛醚干预,模型组大鼠给予等体积生理盐水。于实验中的第7天、14天和21天,分别进行体重检测、糖水消耗量检测和敞箱实验,对大鼠行为学改变进行评定。采用电镜技术观察海马的组织形态;采用流式细胞术检测大鼠海马组织的细胞凋亡情况;采用免疫组化法检测大鼠海马组织内MKP-1、CREB、BDNF蛋白的表达情况;采用实时定量PCR技术检测MKP-1mRNA、CREB mRNA、BDN FmRNA的表达情况。 结果: 1、β-细辛醚增加大鼠体重、糖水偏爱度、水平运动得分和垂直运动得分。实验第1天,敞箱实验检测大鼠行为学,各组无差异。造模7d后,与正常对照组相比,模型组水平运动得分与垂直运动得分明显降低(P<0.05),糖水偏爱度与体重增长稍有降低趋势但无显著性差异(P>0.05);与模型组相比,氟西汀组和β-细辛醚组水平运动得分、垂直运动得分均升高(P<0.05),体重与糖水偏爱度均无显著性差异(P>0.05)。造模14d后,与正常对照组相比,模型组的水平运动得分、垂直运动得分、体重与糖水偏爱度均明显降低(P<0.05~0.01):与模型组比较,氟西汀组和β-细辛醚组水平运动得分、垂直运动得分与糖水偏爱度均明显升高(P<0.05~0.01),体重也升高但无显著性差异(P>0.05)。造模21d后,与正常对照组相比,模型组水平运动得分、垂直运动得分、体重和糖水偏爱度继续明显降低(P<0.0~0.001);与模型组比较,氟西汀组和β-细辛醚组水平运动得分、垂直运动得分、糖水偏爱度与体重均明显升高(P<0.05~0.001)。 2、β-细辛醚抑制抑郁模型大鼠海马组织的细胞凋亡。电镜观察结果显示,与正常对照组相比,模型组的海马神经元细胞形态不规则,细胞结构不完整,细胞核呈现皱缩改变,核膜凹凸不整、模糊不清,并有局部断裂;胞质内线粒体、粗面内质网数量减少,并有变性等病理改变。与模型组相比,氟西汀组和β-细辛醚组神经元细胞形态较完整,可见一定数量的线粒体及粗面内质网。流式细胞术检测结果显示,与正常对照组相比,模型组海马CA3区凋亡细胞平均数明显增加(P<0.05);与模型组相比,氟西汀组、β-细辛醚组海马CA3区凋亡细胞平均数明显减少(P<0.05),β-细辛醚组海马CA3区凋亡细胞减少更明显。 3、β-细辛醚升高抑郁模型大鼠海马组织CREB和BDNF活性和蛋白表达。免疫组织化学检测结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠海马CREB和BDNF蛋白表达的积分光密度均明显降低(P<0.05);与模型组相比,氟西汀组、β-细辛醚组CREB和BDNF蛋白表达的积分光密度增加(P<0.05)。实时定量PCR技术检测结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠海马CREBmRNA和BDNFmRNA表达均明显降低(P<0.05);与模型组相比,氟西汀组、β-细辛醚组CREBmRNA和BDNFmRNA表达增加(P<0.05)。 4、β-细辛醚具有下调抑郁模型大鼠海马组织MKP-1的蛋白和MKP-1mRNA表达的作用。免疫组织化学检测结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠海马MKP-1蛋白表达的积分光密度均明显升高(P<0.05);与模型组比较,氟西汀组、β-细辛醚组MKP-1的表达明显降低(P<0.05)。实时定量PCR技术检测结果显示,与正常对照组相比,模型组大鼠海马MKP-1mRNA的表达明显增加(P<0.05);与模型组相比,氟西汀组、β-细辛醚组MKP-1mRNA的表达明显降低(P<0.05)。 结论: 1、β-细辛醚具有明显的抗抑郁作用。 2、MKP-1作用于ERK1/2信号通路上的ERK1/2分子,是ERK1/2信号通路的负调控因子。β-细辛醚作用于MKP-1,从而调控ERK1/2信号通路,为治疗抑郁症提供了新的靶点。