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以鲤鱼(Cyprinus carpio)为研究对象,采用RT-PCR、SDS-PAGE电泳、ELISA等分子生物学及免疫学技术,对鲤鱼肠道钠/葡萄糖共转运载体1(sglt1)基因的克隆、表达及Sglt1抗体制备进行了研究。克隆了sglt1全长cDNA;表达了由sglt1基因编码、长度为92个氨基酸且具有一个抗原决定簇的多肽;以纯化的多肽为抗原,通过免疫新西兰长耳兔,成功获得了具有较高效价的Sglt1抗体。1、具有抗原决定簇多肽的表达。从鲤鱼肠道中克隆了sglt1基因编码区全长序列,选用pET-32a(+) Vector作为表达载体,设计限制性酶切位点EcoR I和Hind III,将编码92个氨基酸、具有Sglt1抗原决定簇的核苷酸片段连接至pET-32a(+)上,经筛选获得阳性重组子pET-32a(+)-sglt1(抗原决定簇片段);将阳性重组子转化至E.coli Rosetta中,获得重组因工程菌。通过IPTG诱导表达,获得目标多肽。SDS-PAGE电泳分析表明,目标多肽分子量约为30kDa。2、Sglt1抗体制备。以获得的多肽为抗原,与完全弗氏佐剂或不完全弗氏佐剂混合,采用耳缘静脉结合皮下注射,免疫新西兰长耳兔4次,免疫总时长为38d。成功制备了鲤鱼Sglt1抗体,ELISA测得效价为1:105。通过免疫组织化学,验证了抗体的使用效果。结果表明,本研究制备的抗体可以成功应用于鲤鱼Sglt1的表达定位研究。本研究制备的Sglt1多克隆抗体是重要的研究工具,为鲤鱼肠道Sglt1表达及转运活性的系统研究奠定了基础。同时,获取的Sglt1多克隆抗体亦可用于其它鱼类Sglt1转运蛋白表达定位和表达定量研究。