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摘要背景和目的:心脏移植是治疗终末期心脏病的最有效的方法。然而由于心脏的唯一性,使得脑死亡供心是心脏移植的主要来源。因此对脑死亡状态下心脏形态及功能的变化进行研究,可为将来更好的利用脑死亡供心提供实验和理论依据。脑死亡后处于脑死亡的机体脱离中枢神经系统的控制而失去内环境平衡,脑死亡机体与受者机体的内环境不同,且主要与体液性调节因素有关。脑死亡后供体血流动力学的剧烈改变及循环中生化指标的紊乱,导致心肌细胞凋亡,并引起严重的心肌损伤。近年来,脑死亡后心肌细胞凋亡在移植术后心脏损伤方面的作用越来越受到重视。激素复苏是在脑死亡后给予激素(甲泼尼龙琥珀酸钠、胰岛素),补充激素以保护脑死亡机体的脏器功能,即激素复苏。本论文就脑死亡后,摘除供心前激素复苏对心肌细胞凋亡的影响进行研究,探讨激素复苏与脑死亡后心肌细胞凋亡的关系。方法:采用颅内加压法建立版纳小耳猪脑死亡模型,18只版纳小耳猪被随机分为3组:(1)脑死亡对照组6只,(2)甲泼尼龙琥珀酸钠组6只,(3)甲泼尼龙琥珀酸钠加胰岛素组6只。各组均采用静脉全身麻醉后行气管切开插管,呼吸机辅助呼吸,颈内动静脉插管检测实时动脉血压和中心静脉压,开颅并颅内放置Foley气囊导管,行颅内加压法建立脑死亡模型。对照组仅给予林格氏液和低分子右旋糖酐。甲强龙组在对照组用药的基础上,于制造脑死亡模型前0.5小时静脉输注甲泼尼龙琥珀酸钠。甲强龙加胰岛素组除在给予甲强龙之外监测脑死亡前后的血糖水平,给予胰岛素控制血糖在7mmol/L以下。各组均维持10小时后开胸取心。心肌组织电镜下观察超微结构及经HE染色后光镜下观察心肌组织病理学改变。采用TUNEL染色法观察各组心肌细胞凋亡指数(AI,apoptosis index),采用RT-PCR技术检测脑死亡后心肌细胞内FAS、BAX的表达变化。资料统计使用SPSS11.5软件进行统计学处理。结果:1在脑死亡后供心切取前,对照组和甲强龙组及甲强龙加胰岛素组均发生明显的心肌细胞损伤,表现为心肌细胞实质及间质水肿,间隙增大,线粒体肿胀,线粒体嵴模糊破碎,个别细胞出现细胞核固缩,染色质断裂成片段,趋向核膜,部分心肌横纹不清,有不同程度溶解或消失。2甲强龙与胰岛素对脑死亡后供心切取前的心肌细胞凋亡指数并未产生影响,对照组和甲强龙组及胰岛素组各组之间无差异(P<0.05)。3甲强龙与胰岛素对脑死亡后供心切取前的心肌细胞FAS, BAX的mRNA表达量并未产生影响(P<0.05)。结论:]应用缓慢间断颅内加压法制造版纳小耳猪脑死亡模型,经有效的呼吸和循环支持,脑死亡状态可稳定维持10小时。2脑死亡可导致版纳小耳猪心肌细胞损伤,随着脑死亡时间的延长可出现形态学变化。3脑死亡可导致版纳小耳猪心肌细胞凋亡,并对心肌细胞造成一定影响。4脑死亡可导致版纳小耳猪凋亡蛋白FAS, BAX含量升高,引起心肌细胞凋亡5使用甲强龙及胰岛素干预脑死亡进程后,凋亡蛋白FAS, BAX含量无变化,其对于心肌细胞的保护不是通过影响FAS及BAX来发挥作用的。6使用甲强龙及胰岛素干预脑死亡进程后,心肌细胞凋亡指数无变化,其保护心肌作用和心肌细胞凋亡无关系。